利用AFLP标记,就榧树(TorreyagrandisFort)的雌雄株鉴定开展了研究,获得了以下结果:1.首次采用CTAB裂解.硅珠吸咐法,成功提取了榧树叶片和胚乳高质量的DNA,其OD260/OD280值大多在1.8-2.O之间,且琼脂糖凝胶电泳条带明亮、清晰。2.首次建立了适合榧树叶片和胚乳的AFLP实验体系,为今后榧树分子生物学研究、构建遗传图谱奠定了基础。AFLP实验体系具体如下:榧树DNA酶切连接体系为一步法:DNA为500ng,反应体积为25μl,包括Mse I、EcoR I、T4连接酶、M接头、E接头、l00×BSA、10×NEBtlffer2和T4缓冲液。37℃酶切连接过夜,12h可酶切完全。预扩增优化体系:20μl的反应体系含模板DNA,dNTP,Mg2+,Taq聚合酶,MseI预扩引物和EcoRI预扩引物,缓冲液。PCR程序:94℃变性30s,56℃退火60s,72℃延伸60s,25个循环;72℃延伸5min。选择性扩增优化体系:20μl的反应体系中有模板DNA,dNTP,Mg2+,Taq聚合酶,MseI选扩引物和EcoRI选扩引物,缓冲液。PCR扩增程序:95℃变性30s,65℃退火40s,72℃延伸60s,13个循环,每个循环退火温度降低0.7℃;95℃变性30s,56℃退火40s,72℃延伸60s,25个循环,最后72℃延伸5min。选择性扩增产物用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,并进行银染。3.从64对选择性扩增引物中筛选出了适合胚乳AFLP分析的引物组合20对,适合叶片分析的15对,既适合胚乳又适合叶片的引物7对。4.利用AFLP分析技术,用引物对E-AGC/M-CAT得到一条雌性榧树特异的条带。5.这条榧树雌性性别特异性条带,仅可以对榧树的雌、雄株进行鉴别,不能区分雌株与雌雄同株的个体,也不能区分同是雌性的品种香榧与其它自然变异类型的榧树。研究结果可应用于生产,解决榧树章期雌雄株鉴别的问题。