研究背景／目的慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉（CRSwNP）的病因学研究一直是鼻科学研究领域的热点和难点。目前认为CRSwNP是一种多诱因疾病，变态反应和慢性炎症在其发病中起重要作用，与疾病发生相关的各种细胞因子、血管内皮粘附分子和化学性趋化因子多已被证实，但对于导致鼻腔外侧壁粘膜炎性浸润、诱发生物学效应的最初致病原尚不明确。近年，随着鼻息肉病因学研究的发展，欧美有学者提出“超抗原”假说，认为金黄色葡萄球菌肠毒素，作为细菌超抗原，能够激活并增殖CD⁴⁺、CD⁸⁺T细胞，B细胞，巨噬细胞，抗原递呈细胞，嗜酸性粒细胞和上皮细胞，产生相应的细胞因子、炎性介质，引发炎症级联反应，导致鼻腔外侧壁粘膜炎性浸润、组织水肿，因此，认为金葡菌超抗原可能是鼻息肉形成的始发因素。目前，有关超抗原在CRSwNP发病机制中的作用尚未完全阐明，仍存在争议。本研究的目的在于：1．通过对CRSwNP患者鼻息肉表面分泌物进行金黄色葡萄球菌检测，并与慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉（CRSsNP）的患者及正常人群鼻腔中菌群谱作比较，分析金黄色葡萄球菌与慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉发生、发展的关系。2．通过对CRSwNP患者的鼻息肉组织和CRSsNP患者及正常对照者的鼻-鼻窦粘膜进行金黄色葡萄球菌超抗原的直接检测，探讨金黄色葡萄球菌超抗原与慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉发生的相关性及其意义。方法1．严格无菌操作下，对42例慢性鼻-鼻窦炎伴双侧鼻息肉患者的鼻息肉表面分泌物、27例Ⅰ型慢性鼻—鼻窦炎患者和12例正常对照者的上颌窦窦口周分泌物，进行细菌培养、分离和鉴定。2．功能性鼻内窥镜手术中取CRSwNP患者的鼻息肉组织、CRSsNP患者的钩突和上颌窦前下壁粘膜组织，并取正常者上颌窦口水平的中鼻甲外侧份粘膜组织作为正常对照，采用酶联免疫吸附实验（ELISA）对致病机制中最常见的三种金黄色葡萄球菌超抗原（SEA、SEB和TSST-1）进行检测。结果1．鼻-鼻窦分泌物细菌培养、鉴定结果：各组患者鼻腔分泌物中均以正常菌群和非需氧菌生长居多，阳性病原菌以葡萄球菌属多见，包括金黄色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、施氏葡萄球菌、表皮葡萄球菌、木糖葡萄球菌，但无优势致病菌属存在。各组患者鼻腔分泌物中金黄色葡萄球菌阳性率分别为：息肉组7.14％（3／42），鼻窦炎组3.70％（1／27），正常对照组0.00％（0／12）。各组间差异无显著性意义（P＞0.05）。2．鼻息肉或鼻-鼻窦粘膜组织中金黄色葡萄球菌超抗原ELISA检测结果：42例鼻息肉组织中超抗原阳性者23例，阳性率为54.76％，分别是SEA阳性4例，SEB阳性13例，TSST-1阳性8例，其中2例同时检测出2种毒素（SEB和TSST-1，SEA和SEB）；细菌培养金葡菌阳性的3例鼻息肉中，1例超抗原检测为阴性。鼻窦炎组和正常组均无阳性检测结果。鼻息肉组超抗原阳性率分别与鼻窦炎组和正常组比较，差异均有非常显著意义（P＜0.01）。结论1．金黄色葡萄球菌在CRSwNP患者鼻腔中存在率较低，且与CRSsNP患者及正常人群无明显差异。对此，还需进一步研究，或许可提供更加准确的实验数据。2．金葡菌超抗原在CRSwNP患者的鼻息肉组织中有较高的检出率，而CRSsNP及正常对照组中均无超抗原存在。提示金葡菌超抗原与慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉的发生、发展存在一定的相关性。研究背景／目的近年，随着对慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉（CRSwNP）发病因素和机制的深入研究，有学者提出“超抗原”假说，认为金黄色葡萄球菌超抗原，在CRSwNP的发病中起重要作用，可能是鼻息肉形成的始动因素。金黄色葡萄球菌超抗原，能够与宿主T细胞上的特异性受体TCRVβ结合，继而激活T细胞，诱导其克隆性增殖、过度活化并分泌多种细胞因子，发挥生物学效应，导致鼻腔外侧壁粘膜的最初损伤。金葡菌超抗原在CRSwNP患者病变局部存在，并与靶受体TCRVβ特异性结合、异常活化T淋巴细胞的反应，是验证“超抗原”假说所必需的。目前，对于“超抗原”假说的研究已表明CRSwNP患者的鼻息肉组织中确有金葡菌超抗原的存在，也有少数学者对鼻粘膜中的TCRVβ进行了检测，但关于外周血中TCRVβ⁺T细胞的表达情况以及不同的超抗原对鼻息肉患者TCR Vβ家族基因谱不同的选择性表达作用的研究甚少。本研究的目的在于：1．通过检测和比较CRSwNP、CRSsNP患者及正常人群外周血和局部鼻粘膜组织中TCRV B⁺T细胞的表达含量，探讨金黄色葡萄球菌超抗原对慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉患者T细胞的活化作用。2．通过检测和比较CRSwNP、CRSsNP及正常者鼻-鼻窦粘膜中24个TCRVβ家族成员mRNA的表达，分析超抗原对CRS患者T细胞Vβ家族基因谱表达格局的影响，探讨超抗原在慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉发生中的可能作用机理。方法1．采用流式细胞技术，检测42例慢性鼻-鼻窦炎伴双侧鼻息肉患者、27例Ⅰ型慢性鼻-鼻窦炎患者和12例正常对照者的外周血和局部鼻-鼻窦粘膜组织中TCRVβ⁺T细胞的表达情况。2．应用逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR），对CRSwNP患者的鼻息肉组织、CRSsNP患者和正常对照者的鼻-鼻窦粘膜中TCRVβ的24个亚家族mRNA的表达情况进行检测，并分析其与金葡菌超抗原的特异性作用关系。结果1．TCRVβ⁺T细胞在外周血中的表达：鼻息肉组、鼻窦炎组和正常组Vβ⁺T细胞的表达率分别为51.64％，37.68％，和12.50％；鼻息肉组内，超抗原阳性亚组53.19％，超抗原阴性亚组49.31％。超抗原阳性和超抗原阴性鼻息肉组TCRVβ⁺T细胞的表达率与鼻窦炎组比较，差异均无显著性（P＞0.05）；与正常组间的差异则均具有非常显著意义（P＜0.01）；鼻窦炎组与正常组比较，差异具有显著性意义（P＜0.05）；超抗原阳性亚组较超抗原阴性亚组，TCRVβ的表达有上升趋势，但差异无显著性意义（P＞0.05）。2．TCRVβ⁺T细胞在局部鼻粘膜中的表达：鼻息肉组、鼻窦炎组和正常组Vβ⁺T细胞的表达率分别为54.33％，41.95％，和27.13％；超抗原阳性亚组与超抗原阴性亚组，分别是57.17％和50.92％。鼻息肉组及其超抗原阴性亚组与鼻窦炎组比较，Vβ⁺T细胞的表达率组间差异均无统计学意义（P＞0.05），但超抗原阳性鼻息肉亚组与鼻窦炎组比较，表达率显著性增高（P＜0.05）；鼻窦炎组与正常组比较，差异无显著性意义（P＞0.05）；超抗原阳性组较超抗原阴性组，TCRVβ的表达有明显上升趋势，但差异无显著性意义（P＞0.05）。3．TCRVβ家族成员mRNA的表达，在数量上各组间及鼻息肉组内各患者间存在较大差别：鼻息肉患者，少则表达3个Vβ亚家族，多则表达16个亚家族；鼻窦炎组Vβ亚型的表达数量大致相同，约16～18个；正常鼻粘膜则表达全部24个TCR Vβ家族成员基因片段。4．TCRVβ家族成员mRNA的表达，在表达强度上出现与金葡菌超抗原ELISA检测结果密切相关的优势表达：SEB阳性标本Vβ3、14、15、17、20，TSST-1阳性者Vβ2、Vβ6.1-3，较正常和鼻窦炎组及超抗原阴性鼻息肉组均显著性增高（P＜0.05）；超抗原阴性粘膜组织中无集中优势表达基因。结论1．CRSwNP患者的外周血和局部息肉组织中，均出现TCRVβ⁺T细胞的明显扩增现象，金葡菌超抗原阳性的鼻息肉组织中Vβ⁺T细胞的增殖尤为显著，具有统计学意义。2．存在金葡菌超抗原的鼻息肉组织中T细胞所表达的TCRVβ家族基因谱，出现了与其超抗原作用靶点相一致的选择性优势表达格局。3．金葡菌超抗原通过与相应的特异性TCRVβ亚型作用，激活CRSwNP患者的Vβ⁺T细胞，在慢性鼻-鼻窦炎的发生和发展中可能起重要的致病作用。研究背景／目的糖皮质激素（GC）是目前临床上治疗慢性鼻-鼻窦炎的首选药物，但不同患者对GC治疗的敏感性不同，部分患者虽规律应用GC，仍有鼻息肉的发生或复发，出现了激素抵抗现象。这或许是慢性鼻-鼻窦炎药物及手术综合治疗后，鼻息肉仍高复发率的重要因素之一。GC必须首先与糖皮质激素受体（GR）结合才能发挥生物学作用，而不同的GR亚型执行不同的生物学功能，GRα是GC发挥作用的功能型受体，GRβ是GRα的内源性抑制性受体，拮抗GC的抗炎、抗免疫作用。目前，对GC抵抗机制的研究多从GR角度探讨，但其产生的分子基础和病理机制仍不清楚。关于慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉激素治疗不敏感的相关实验研究不多，且主要是仅对GRβ表达含量的检测或是体外培养实验，对于诱导GRβ过表达的因素及其作用机制的研究甚少。本研究的目的在于：1．通过检测GC规律治疗后复发性鼻息肉和无复发的Ⅰ型、Ⅱ型慢性鼻-鼻窦炎患者鼻粘膜中GRα和GRβ的表达，并与嗜酸粒细胞（EOS）的粘膜浸润程度比较，探讨GR在慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉发生、发展及复发过程中的可能作用，其与激素抵抗的关系。2．通过检测金葡菌超抗原阳性和阴性鼻息肉组织中GRα、GRβ和EOS的表达，分析细菌超抗原对糖皮质激素受体异常表达的作用，探讨金葡菌超抗原在慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉激素治疗不敏感中的可能作用及机制。方法1．采用免疫组织化学技术，检测23例超抗原阳性鼻息肉、19例超抗原阴性鼻息肉、17例复发鼻息肉、18例随访1.5～2.0年无复发的鼻息肉及12例随访无鼻息肉伴发的Ⅰ型慢性鼻-鼻窦炎患者鼻粘膜中GRα和GRβ的表达。2．对上述慢性鼻-鼻窦炎不同病程阶段的石蜡切片行HE染色，EOS计数，分析其与金葡菌超抗原、GR亚型异常表达的关系。结果1．GRα和GRβ在各组患者鼻-鼻窦粘膜上皮、腺体和炎症细胞的胞浆和胞核中均有表达，主要表达在上皮和腺体细胞的胞浆中。2．超抗原阳性息肉组GRα阳性细胞数，略高于超抗原阴性息肉组，无明显差异；复发息肉组较无复发息肉组GRα阳性细胞数稍有降低，但差别甚微；鼻窦炎组和正常对照组间的表达差异亦不明显；四组鼻息肉分别与鼻窦炎组和正常组比较，GRα的表达虽均有增高，但差异均无显著性意义（P＞0.05）。3．复发息肉组中GRβ的表达较无复发息肉组有增高趋势，超抗原阳性息肉组较超抗原阴性息肉组有明显的增高趋势，但差异均无显著性意义（P＞0.05）；超抗原阳性和阴性息肉组间GRβ的表达差异，比复发和无复发息肉组间的差异明显；GRβ在鼻窦炎组的表达明显高于正常组的表达，但差异无统计学意义（P＞0.05）；四组鼻息肉中GRβ的表达，较鼻窦炎组和正常组均呈显著性增高（P＜0.05）。4．超抗原阳性和超抗原阴性息肉组分别与正常对照组比较，GRβ／GRα比值均显著性增高（P＜0.05）；复发息肉组、无复发息肉组分别与正常组比较，GRβ／GRα比值亦明显增高（P＜0.05）；增高幅度以超抗原阳性息肉组最为明显，其次为复发息肉组。但各鼻息肉组分别与鼻窦炎组比较，差异均无显著性意义（P＞0.05）。虽然超抗原阳性和阴性息肉组、复发和无复发息肉组GR比值组间差异均无显著性意义，超抗原阳性和阴性息肉组间的差异，比复发和无复发鼻息肉组间的差异明显。5．超抗原阳性息肉组与超抗原阴性息肉组比较，EOS计数增高，但差异无显著性意义（P＞0.05）；复发息肉组较无复发息肉组EOS有增高趋势，差异亦无显著性（P＞0.05）；四组鼻息肉组织中EOS计数均非常显著地高于鼻窦炎组和正常对照组（P＜0.01）：鼻窦炎组与正常组鼻-鼻窦粘膜中EOS均较少。结论1．GRα和GRβ在各组患者的粘膜上皮、腺体和炎症细胞的胞浆和胞核中均有表达，主要表达在上皮和腺细胞胞浆。2．GRα在慢性鼻-鼻窦炎各病程阶段均未出现抑制性表达。3．GRβ在慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉中显著高表达，以超抗原阳性鼻息肉组织中的增高最为明显，提示超抗原具有诱导GRβ表达的作用。4．慢性鼻-鼻窦炎不同病程中GRβ／GRα比值变化同GRβ的表达变化情况相一致，而且在正常鼻粘膜中GR的存在形式以GRα亚型居多，但在慢性炎症状态下，GRβ的表达明显多于GRα。5．EOS在慢性鼻-鼻窦炎不同病程中的粘膜浸润程度与GRβ的高表达存在一致性，提示GRβ能够抑制GC对EOS的调控作用，具有GC效应抑制性作用。6．GRβ的高表达是激素治疗不敏感的分子机制之一；金葡菌超抗原能够加重GRβ的高表达现象，有可能籍此诱导激素治疗抵抗。