拟南芥转录因子CBF1及NAC基因的克隆与原核表达

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转录因子(transcription factor, TF)是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质,又称反式作用因子。通过识别与结合真核基因启动子中的顺式作用元件,使目的基因的表达得到精准的调控。拟南芥在植物结构功能、进化遗传及生态学领域的研究被广泛使用,是大家广为熟悉的植物遗传学研究中的模式生物。拟南芥模式植物的优点是其功能基因较容易获得。在植物功能基因的研究中,常常需要实现目的基因以特定的强度、在特定的时间和空间表达的效果,而这正是因为转录因子在这过程中所起的作用。CBF1和NAC是两种重要的激活植物抗逆基因表达的转录因子。拟南芥CBF1转录因子能调控一组抗干旱和抗低温基因的表达,从而有效提高植物体对干旱和低温的抗性能力;拟南芥NAC主要参与调控植物低温、干旱、激素、高盐、生长发育及病原胁迫反应等相关过程。本研究以拟南芥(Arabidopsis thaliana)叶片为研究材料,通过基因克隆和表达的方法初步研究了植物转录因子CBFl和NAC的功能,为后续植物抗逆性能改良打好基础。实验首先用Trizol试剂法提取总RNA,经RT-PCR反转录,之后扩增CBF1基因和NAC基因;接着对目的基因进行克隆筛选,并通过酶切和测序进行鉴定,最后分析序列并利用软件DNAMAN翻译相应蛋白质,预测了蛋白质的水亲和性;最后利用克隆获得的CBFl基因构建原核表达载体,通过诱导表达获取蛋白差异表达谱。SDS-PAGE结果表明CBFl基因表达产物大小为24 kD。本研究获得的初步结果为植物的抗逆研究提供参考,也初步奠定了下一步利用上述基因来改良植物抗逆性的基础。
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