红豆杉细胞培养是目前解决紫杉醇药源紧张问题最有前途的技术之一。传统生产紫杉醇的原料为植物组织材料,与之相应已有较成熟的规模生产工艺。随着新型分离技术的不断发展,传统的生产工艺在某些方面已不能适应生产原料逐渐由植物过渡为细胞培养液的趋势。本研究借鉴传统紫杉醇分离工艺,以更简便的分离方法、更低的生产成本、更高的产量为研究目的,利用现代色谱理论为优化依据,针对红豆杉细胞培养生产紫杉醇的关键技术之一,提出了一套新的分离纯化工艺与方法。主要成果如下:1、使用不同分子质量截留值的有机滤膜将红豆杉细胞培养液中细胞与有效成分分段截留。该方法可将原料体积大幅度缩小,同时减少了胞外紫杉醇的流失,也有利于将细胞中高极性杂质排出,对于工业成本降低与原料的充分利用有重要意义。2、在上步分离步骤后,将膜截留的固体物制成甲醇浸膏。试验了若干树脂填料对紫杉醇的吸附作用,结果显示D-101型大孔吸附树脂可较好地富集浸膏中的紫杉醇。使用乙醇-水体系洗脱,紫杉醇纯度提高至0.8%,回收率比传统液-液萃取工艺略高。此工艺优势在于填料的可回收性好、上样率较高、洗脱溶剂无毒等,以期工业放大后替代传统液-液萃取工艺。3、实验用自制的碱性氧化铝柱与C18柱在常压下对富集产物中的紫杉醇进行中度纯化,在未对层析条件进行优化的情况下,紫杉醇的纯度从0.8%提高到8%,进一步到85%,回收率分别为108%与98%。显示了碱性氧化铝与反相C18柱组合对紫杉醇的后续纯化或精制具有良好的技术适用性。由细胞培养液到反相填料中度分离,紫杉醇的总回收率达到70%,比目前植物组织提取工艺达到同样纯度的产品回收率有显著提高。这种基于实验室规模的紫杉醇分离纯化新工艺,为产业化生产提供了较好的依据。