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目的检测HCCR、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(pERK)、pJNK、pP38及pELK1相关蛋白在胃癌及癌旁组织中的表达,并探讨它们之间的相互联系;进一步研究表皮生长因子EGF经ERK/ELK1信号转导通路诱导胃癌SGC-7901细胞中HCCR表达上调的分子机制。方法1.应用免疫组织化学染色法检测50例胃癌及癌旁组织中HCCR、pERK、pJNK、pP38及pELK1在胃癌组织及癌旁组织中的表达情况。2.用MAPK抑制剂分别处理胃癌SGC-7901细胞1h后,再加入诱导剂EGF(100ng/ml),用Western blot和RT-PCR法检测细胞中HCCR表达变化,报告基因法检测HCCR全长启动子区及ELK1活性变化。3.构建HCCR启动子-210至+30区及ELK1结合点突变的-210至+30区报告基因,转染细胞并加入诱导剂EGF(100ng/ml)诱导,荧光素酶报告基因法检测ELK1结合点突变前后报告基因活性的变化。4.构建ELK1四对siRNA及阴性参照(NE)质粒,采用脂质体介导的基因转染法,转染到HEK/293细胞,鉴定出有效干扰质粒,再用脂质体转染法,转染至胃癌SGC-7901细胞中,获得稳定转染细胞株后共转染-210至+30区及ELK1结合点突变的-210至+30区报告基因,加入诱导剂EGF(100ng/ml)后,报告基因法检测ELK1结合点突变前后报告基因活性的变化。结果1. HCCR、MAPKs激酶及pELK1蛋白在胃癌组织的表达及其相关性HCCR、pERK、pJNK、pP38及pELK1在胃癌组织中的阳性表达率分别为75%(45/60)、83.3% (50/60)、12%(5/60)、31.2%(19/60)及78.3%(47/60),其中HCCR、pERK及pELK1均高于其在癌旁组织中的表达,两者相比均有统计学意义(P<0.05),三者之间表达具有高度相关性,HCCR、pERK及pELK1的表达与性别、年龄、病理分化程度、淋巴结转移及神经浸润无明显相关。2. EGF经MAPK/ERK信号通路诱导HCCR的表达用MAPKs抑制剂分别处理SGC-7901细胞1h后,再加入诱导剂EGF诱导24h,其中在蛋白水平HCCR的表达在加入ERK抑制剂后明显降低,其它两种抑制试剂无明显影响,在mRNA水平,同样在加入ERK抑制剂后明显降低;报告基因检测到HCCR全长启动子区及ELK1活性在加入ERK抑制剂后水平明显降低,其它两种抑制试剂无明显影响。3. HCCR启动子区ELK1突变后报告基因活性较突变前降低报告基因法检测发现在NIH3T3、胃癌SGC-7901细胞株中HCCR启动子区ELK1突变后报告基因活性较突变前降低,两者具有统计学意义(p<0.05)。4.报告基因分析发现稳转干扰ELK1的胃癌SGC-7901细胞株中,转染pGL3-ELK1比pGL3-mELK1的报告基因活性高成功筛选出有效干扰ELK1的siRNA,获得稳定转染胃癌SGC-7901的细胞株;报告基因发现稳转干扰ELK1的胃癌SGC-7901细胞株中,报告基因检测发现野生型质粒及突变型质粒均在EGF诱导后升高,野生型质粒报告基因活性比突变型质粒高。结论1. HCCR在胃癌中高表达,而且与pERK、pELK1存在协同表达,提示可能ERK/ELK1信号通路参与调控HCCR表达。2. EGF能诱导人胃癌细胞SGC-7901中HCCR表达增加,但是会被ERK抑制剂所减弱。3. EGF能提高HCCR全长启动子区及ELK1的报告基因活性,但同样会被ERK抑制剂所抑制。4. HCCR启动子区的ELK1结合点在HCCR转录中起作用;稳转ELK1干扰质粒的胃癌SGC-7901细胞会减弱HCCR启动子区报告基因活性。