论文部分内容阅读
近些年来,许多新发病毒不断出现,严重威胁着人类健康,比如HIV病毒。虽然目前已有多种病毒检测技术,包括血清学检测和基因检测,但是前者费力且灵敏度不高,后者又常常会导致假阳性,因此病毒检测新方法的研究就显得非常迫切。
本研究中,我们在酵母朊病毒的研究基础上提出了基于朊蛋白聚集检测HIVP24抗原的方法,在电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)的研究基础上提出了利用ICP-MS检测纳米金介导的HIVP24抗原的研究。HIVP24是HIV的衣壳蛋白,常作为HIV早期检测中的目标抗原。
在基于蛋白质聚集检测HIVP24)的方法中,我们用朊蛋白的复制代替常见的免疫PCR中DNA的复制,用蛋白酶FactorXa切割经改造的酵母ure2p蛋白,形成强有力的种子,使其成为能诱导全长可溶ure2p蛋白形成不可溶的且抗蛋白酶K消化的朊病毒形式的ure2p。用SDS-PAGE检测蛋白酶K消化后的产物,即可检测HIVP24。
与基因学检测相比,本方法不需要复杂的仪器,可以减少实验步骤,操作简单易行,通过进一步发展,有望成为一种灵敏的病毒检测手段。
在利用ICP-MS检测纳米金介导的HIVP24抗原的研究中,我们在亲和素的磁珠上修饰多克隆抗体,在10nm纳米金上修饰单克隆抗体,利用磁力架分离,将得到的夹心复合物用硝酸溶解,引入ICP-MS检测金元素。
该方法的检测速度快,且检测灵敏度相对较高。因此该方法有望成为临床上快速、准确、灵敏地检测病原的手段。