PXD101对口腔鳞癌Hn-6细胞增殖及凋亡的初步研究

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目的:通过组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)PXD101对口腔鳞癌细胞HN-6进行干预,检测药物对HN-6细胞在增殖、细胞凋亡和细胞周期方面的影响效果。  方法:HN-6细胞放于含有10%的胎牛血清,1%双抗(青霉素100 U/mL和链霉100μg/mL)的DMEM细胞培养液里,放入到5%CO2,37□C细胞培养箱里。每天用倒置显微镜进行观察,待细胞长满瓶底的80%-90%用胰酶消化传代一次。  将HN-6细胞接种于96孔板中,用不同浓度的PXD101药液对其进行干预。分别在24 h、48 h、72 h倒置相差显微镜下观察细胞形态、大小、数量及贴壁等情况,并进行拍照。将对数生长期的细胞常规接种于3块96孔板,置于37℃,CO2培养箱中进行孵育24 h。用DMSO将药物的浓度梯度调整为0.01、0.1、0.5、1、10μmol/L,对其进行作用,24、48、72 h后加入MTT液,震荡10min,将酶标仪波长设置为490nm,进行检测并读取吸光度。细胞常规培养,置入37℃,CO2培养箱中继续培养。24 h后取出培养瓶,加入PXD101进行干预,24、48 h收集细胞,调整细胞密度,1000转离心10 min,弃除上清液,PBS洗涤,将细胞重悬于BindingBuffer,再加入AnnexinⅤ-FITC轻轻混匀,避光室温反应15分钟,加入300μl Binding Buffer,加入5μl PI避光染色15 min,流式细胞仪上测定每个样品的凋亡细胞比率。细胞常规培养,24 h后加入不同浓度的PXD101进行干预,37℃、CO2培养箱中孵育24小时后收集细胞,1000转离心10 min,预冷PBS洗涤,70%乙醇,4℃固定24 h后收集细胞,加PI染液,避光孵育30 min,上机检测。  结果:PXD101可明显抑制HN-6细胞的生长,呈时间剂量依赖性。  在镜下我们能够观察到对照组的细胞处于贴壁状态,呈现多边形的外形,生长状况活跃;而药物处理组细胞脱壁,变小,细胞核皱缩。绘制细胞生长曲线示,随着PXD101的浓度和作用时间的增加,HN-6细胞生长明显受到抑制,各实验组细胞生长抑制率与对照组比较。1μmol/LPXD101作用24 h,48 h细胞总凋亡率分别为20.9%、38.6%;HN-6细胞周期阻滞于G0/G1期。  结论: PXD101体外实验能显著抑制人口腔舌癌HN-6的细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期停滞在G0/G1期。
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