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目的:本课题将探究中频微电流干预神经胶质瘤U251细胞的作用效果,验证中频微电流对U251细胞增殖的抑制作用,筛选出最佳的实验参数。中频微电流将分别联合榄香烯、替莫唑胺(Temozolomide TMZ)干预U251细胞,明确中频微电流对细胞周期和细胞凋亡的影响。目的在于研发一种新型无创的抗肿瘤物理方法——中频微电流技术。方法:1.中频微电流作用U251细胞以U251细胞为实验对象,根据单一变量法,在频率50 kHz时,分别施加50 mA、70 mA、90 mA、110mA、130 mA、150 mA大小的电流,每次刺激30 min,连续3天。实验结束后,采用CCK-8法检测U251细胞的存活率,评价中频微电流干预神经胶质瘤细胞的效果,并确定实验参数。2.中频微电流联合榄香烯作用U251细胞根据初期实验结果,确定中频微电流干预U251细胞的作用参数为50 kHz,150 mA,30 min。本实验设置为对照组,电刺激组、榄香烯组、中频微电流与榄香烯联合组,实验结束后观察U251细胞的形态,检测各组细胞的存活率,并通过流式细胞仪分析细胞凋亡和周期情况,探讨中频微电流联合榄香烯作用U251细胞的协同增效作用。3.中频微电流联合TMZ作用U251细胞根据初期实验结果,确定中频微电流干预U251细胞的作用参数为50 kHz,150 mA,30 min。本实验设置为对照组,电刺激组、TMZ组、中频微电流与TMZ联合组,实验结束后观察U251细胞的形态,检测各组细胞的存活率,并通过流式细胞仪分析细胞凋亡和细胞周期情况,探讨中频微电流联合TMZ作用U251细胞的协同增效作用。结果:1.随着中频微电流频率(50 mA-150 mA)的增大,U251细胞的相对增殖率呈下降的趋势,实验组细胞存活率低于对照组(P<0.05)。2.中频微电流(50 kHz,150 mA,30 min)作用U251细胞后,细胞存活率为(86.49±0.23)%(P<0.01)。中频微电流联合榄香烯(IC50)干预U251细胞后,细胞数目明显减少,细胞间隙增大,漂浮的细胞碎片较多,胞体皱缩,检测到细胞存活率为(36.20±1.04)%(P<0.01);联合组能够增加细胞凋亡率,其中早凋亡期和晚凋亡期细胞在占全部细胞的(68.5±1.65)%(P<0.01);在细胞周期方面,主要阻滞251细胞于G2/M期,占(57.09±1.52)%(P<0.01),但对细胞S期的影响较小。3.中频微电流联合TMZ(IC50)作用U251细胞后,CCK-8法检测到细胞存活率为(33.28±1.67)%(P<0.01);联合组能够显著增加细胞凋亡率,将U251细胞阻滞于G2/M期,但对细胞S期的作用弱。结论:中频微电流对于胶质瘤U251细胞有一定的抑制作用,中频微电流与榄香烯联合应用时能协同抗肿瘤细胞作用,影响胶质瘤细胞增殖的机制可能是诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期;中频微电流联合TMZ可增加U251细胞的凋亡率并将其阻滞于G2/M期,说明中频微电流对TMZ产生协同增效作用,是解决化疗药物耐药性问题的新尝试。中频微电流抗肿瘤的研究为神经胶质瘤的治疗提供了新的思路,为我国自主创新发展肿瘤物理治疗新技术开拓方向,但中频微电流的临床应用尚面临许多问题。