猪细小病毒PPV2010株的分离及基因组演化分析

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猪细小病毒病是由猪细小病毒(PPV)引起的一种以母猪流产、胎儿死亡、胎儿畸形、木乃伊化及弱胎为主要特征的猪的繁殖障碍性疾病。该病在世界范围内流行,严重地影响了养猪业的发展。本研究对吉林地区一猪场的一批流产母猪进行了病料采集,在PK-15细胞上进行了病毒的分离,经盲传后,病毒可在PK-15细胞上产生明显的病变,经电镜观察和免疫荧光鉴定,证明所分离到的病毒为PPV,将分离到的病毒命名为PPV2010。根据GenBank上已经公布的PPV序列设计了5对特异性引物,每段引物所扩增的片段在起始和末尾处相互重叠,得到的5个PCR产物,分别经胶回收后连接pMD18-T载体,重组质粒经酶切鉴定正确后测序,所得结果利用DNASTAR软件进行全长序列的拼接,将PPV2010全长序列上传至GenBank,获得序列号JN872448。收集了GenBank上公布的PPV全长、NS1基因和VP2基因的序列,先经MUSCLE比对,再经Se-Al手工比对,利用ModelTest3.7计算得到所有数据组的最适核苷酸替代模型均为GTR+G+I.利用PAUP4.0进行了系统发生树的构建。利用DNASTAR软件比较了各毒株间的核苷酸和氨基酸同源性。研究结果表明PPV2010株与BQ株的同源性最高。利用RDP对PPV的重组进行了分析,结果显示在PPV的进化过程中并没有发生重组事件。对PPV的MCC tree构建结果显示PPV是一种大概在164年(95%HPD:55-397)以前就已经存在的病毒。本研究获得的病毒为PPV进一步生物学研究提供了实验材料,同时对PPV的进化分歧时间得出了新的结论。
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