黏菌代表种的个体发育相关基因表达及系统发育关系研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:sunnynoon
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黏菌是一类遍布全球的生物群,其生活环境类型多样,常见于森林阴凉湿润处。黏菌在细胞遗传学、生理生化、活性成分开发等多方面具有重要的理论研究和应用价值,常常被用作研究细胞衰老、癌症的模型生物。基于其生活史特征,黏菌的分类存在着很大的争议。繁殖阶段的黏菌子实体存在大量孢子,形态上与真菌相似,并称为"Myxomycetes"归属为植物;而孢子萌发后的游动胞、黏变形体、及营养生长阶段的原质团又体现了黏菌与动物相似的活动特性,由此,黏菌也曾被归入动物界,被称为"Mycetozoa"。本研究通过对黏菌主要类群营养阶段和繁殖阶段的基本特征及系统发育关系的探讨,为黏菌的起源与进化研究提供理论依据。通过对来自吉林省、秦岭和内蒙古地区的基物进行培养共获得5目7科22属54种黏菌,其中发现两个内蒙古新纪录种:大孢钙皮(Didymium megalosporum),垂丝菌(Enerthenema papillatum)。吉林省和内蒙古基物培养黏菌的优势科为团毛菌科,而秦岭基物培养黏菌的优势科为发网菌科。实验采用Trizol法对针箍菌和暗红变毛菌的子实体和原质团总RNA进行提取,并以β-actin基因为实时定量PCR内参基因,CaM为目标基因。实验结果显示,CaM基因在两种黏菌的子实体与原质团时期均有稳定表达。在两种黏菌的原质团中的CaM表达量明显高于子实体阶段,同时,针箍菌的原质团与子实体中的CaM表达量高于暗红变毛菌的原质团与子实体。在系统发育研究中,对黏菌纲3目19种黏菌的SSU rRNA、EF-1α和Actin基因进行PCR扩增及测定,并在Genbank上进行注册,注册号为:JQ277908-JQ277932。基于ML及贝叶斯法构建系统发育树,其中团毛菌目多独立形成一个分枝,绒泡菌目和发网菌目可聚集在一起,形成姊妹类群。在SSU rRNA进化树中,绒泡菌目及发网菌目的黏菌出现分散在不同分枝的现象。基于三个系统发育树,推测绒泡菌目的白柄菌的进化程度可能较原始,以致白柄菌保持了与绒泡菌目及发网菌目都相似的形态特征。对于黏菌种内分子关系的探讨,以鳞钙皮菌Didymium squamulosum为例,通过PCR扩增,获得鳞钙皮菌子实体及原质团的SSU rRNA和5.8S rRNA基因序列,以灰团网菌Arcyria cinerea的相应基因片段作为外源群,用NJ法构建亲缘关系树。Genbank上的注册号为:JQ277928, JQ693477, JQ742018。根据分子关系推断,来自美国阿拉斯加州,新西兰及日本鳞钙皮菌的遗传信息并非单一来源。由于黏菌孢子随风传播距离较远,标本采集地点的基因信息不连贯,核糖体基因标记系统树未能完全体现出地域差异及迁徙变化。
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