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目的: 肺癌是目前我国发病率与死亡率最高的恶性肿瘤。根据组织学类型的不同，肺癌主要分为两种:小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)和非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)，其中NSCLC约占85％。由于肺癌起病隐匿，临床观察发现约有30-50％的患者确诊时已是晚期，导致可用的治疗手段非常有限。目前肺癌的治疗手段除了传统的手术治疗、放疗及化疗以外，还有近年来兴起的靶向治疗、基因治疗及免疫治疗等新的治疗方法。尽管治疗方法在不断进步，肺癌的预后依旧很差，五年生存率仍然很低。因此，明确肺癌的增殖及转移机制，并寻找作用于这一过程的关键信号靶点依然是目前抗肿瘤研究的重点。 方法与结果: 第一章、SHIP1在NSCLC患者中低表达及与患者预后的关系 方法: 1、收集26对NSCLC组织标本及距肿瘤边缘5cm左右的癌旁非癌肺组织标本; 2、利用实时荧光定量PCR检测SHIP1在26对NSCLC组织标本及癌旁非癌组织标本中的表达情况，并统计分析各组标本中SHIP1在mRNA水平的表达差异。 3、组织芯片从上海芯超生物技术有限公司购买（包含68例原发性肺腺癌标本、78例原发性肺鳞癌标本和59例正常组织标本）。利用免疫组织化学法检测SHIP1在其中的表达情况，统计分析各组标本中SHIP在蛋白水平的表达差异，并探讨SHIP1的表达与临床各参数及患者预后的相关性。 4、利用数据库预测SHIP1表达与其启动子区CpG岛及EGFR/KRAS突变之间的关系。 5、在多株NSCLC细胞中检测SHIP1的基础表达，筛选出合适细胞株用于后续生物学功能实验。 结果: SHIP1在NSCLC组织中低表达，其表达水平与启动子区甲基化无关，与临床常见的肺癌突变基因EGFR/KRAS突变无关，但与患者不良预后显著相关。 第二章、SHIP1调控PI3K/AKT通路抑制NSCLC增殖 方法: 1、登录NCBI Gene数据库，查询获得人SHIP1基因CDS区序列(NM001017915.2)，利用Primer-BLAST设计引物，构建SHIP1过表达质粒。 2、将SHIP1过表达质粒包装成慢病毒，用其感染NSCLC细胞，构建稳定过表达SHIP1的NSCLC细胞株;感染对照组慢病毒的NSCLC细胞记为NC组，感染SHIP1过表达慢病毒的NSCLC细胞记为SHIP1组。 3、利用NC组细胞和SHIP1组细胞，通过一系列生物学功能实验在体外验证SHIP1对NSCLC增殖能力的影响。 MTS检测细胞活力 流式细胞术检测细胞周期分布 4、利用NC组细胞和SHIP1组细胞构建BALB/c裸鼠体内移植瘤模型，在活体内验证SHIP1过表达对NSCLC细胞移植瘤生长的影响。 5、在NC组和SHIP1组的NSCLC细胞中，Western blot检测细胞周期相关蛋白的变化，明确SHIP1调控细胞增殖的机制。 结果: 过表达SHIP1可以抑制NSCLC细胞的增殖，其机制与抑制PI3K/AKT介导的细胞周期转换有关。 第三章、SHIP1调控PI3K/AKT通路抑制NSCLC转移 方法: 1、利用NC组细胞和SHIP1组细胞，通过Transwell小室迁移实验及Boyden小室侵袭实验在体外验证SHIP1过表达对NSCLC细胞转移能力的影响。 2、构建NC组细胞及SHIP1组细胞BALB/c裸鼠肝内转移模型，在活体内验证SHIP1过表达对NSCLC细胞转移能力的影响。 3、在NC组和SHIP1组的NSCLC细胞中，Western blot检测EMT相关蛋白的变化，明确SHIP1调控细胞侵袭转移的机制。 结果: 过表达SHIP1可以抑制NSCLC细胞的转移，其机制与抑制PI3K/AKT介导的EMT过程相关。 结论: 1、SHIP1在NSCLC中低表达，可以作为NSCLC的候选抑癌基因，与NSCLC患者预后显著相关。 2、SHIP1可以通过调控PI3K/AKT通路介导的细胞周期转换和EMT过程抑制NSCLC细胞的增殖与转移。