核酸测序法检测HCV基因型及分子流行病学研究

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目的:丙型肝炎病毒(HCV)感染所致丙型肝炎为全球传染性疾病,是导致慢性肝病、肝硬化和肝细胞癌的主要原因之一。HCV基因型在HCV感染、传播、预后及抗病毒治疗效果等方面有重要意义,同时能够给流行病学研究提供重要依据。HCV基因组具有高度的变异性,根据基因组核苷酸序列的差异,HCV被分为6种基因型。近年来,虽然国内关于HCV基因型分布的报道逐渐增多,但存在地域性差异及选用分型方法不同等问题。因此,为了更好的了解中国HCV的分子流行病学特征,我们使用核酸测序法对国内11个省份的307例HCV标本进行基因型检测,通过分析本研究结果,深入地探讨我国HCV基因型及亚型的地域分布以及分子流行病学特征,为中国的HCV感染的相关研究提供有价值的资料。方法:收集307份来自我国不同地区的HCV感染者血清标本,使用HCV核酸定量检测试剂提取HCV RNA,实时PCR定量检测HCV RNA载量;同时使用RNA提取试剂提取HCV RNA,反转录PCR法扩增HCV Core/E1区基因片段,对扩增产物进行测序,然后使用NCBI基因分型工具确定基因亚型,分析我国基因型与基因亚型的地域分布特征,以及基因型与宿主性别、年龄和病毒载量的关系。结果:1.在307例HCV标本中,共检测出6个基因亚型,1b型占50.8%(156/307),2a型占19.9%(61/307),3a型占10.7%(33/307),3b和6a型各占8.1%(25/307);1a型占2.3%(7/307),3a、3b、6a和1a型合计占29.3%(90/307)。2.296例可测得载量的HCV标本,80.7%(239/296)的标本属于高HCV RNA载量组(>106IU/mL)。在高、中、低载量组中,1b型均有较高检出率,但中载量组(500-106IU/mL)中以2a型检出为主,占58.5%(24/41)。3.HCV基因型与地域分布、性别、年龄(1)地域分布:HCV基因亚型分布表现出地域性差异,各省份HCV基因型检出率有所差别。南方以1b型为主,占50.0%(97/194),其次为3a型,占16.0%(31/194);北方以1b型为主要基因型,占52%(59/113),其次为2a型,占42.5%(48/113);南北方之间,HCV基因型分布存在差异(p<0.01)(2)性别分布:性别资料明确的286例标本,男女基因型分布总体上无显著差异(x2=7.102,p>0.05),6a型在男女间分布存在显著差异(χ2=8.741,p<0.01),男女间其他基因型分布没有差异(p>0.01)(3)年龄分布:年龄资料明确的274例HCV标本,基因型在各年龄分布存在显著差异(x2=62.322,p<0.05)。1b、2a型在各年龄组检出率均较高,主要分布在≥31岁以上患者中;21-30岁和31-40岁年龄组中,基因型分布趋于均衡,1b和2a两型分别占44%和50%,非1b、2a型感染总和≥50%。结论:本研究结果表明,在我国,HCV感染分布主要以基因1b型为主,其次为2a型。南方以1b、3a型为主,北方则以1b、2a型为主,基因型的地域性分布特征较为明显。非1b、2a型的检出率之和明显升高,提示我国HCV基因型感染的地域性分布特征有所变化。HCV基因亚型分布与性别、年龄和病毒载量间也存在一定的关系。本研究获得国内具有代表性的HCV感染分子流行病学资料,同时提示推广HCV基因分型检测十分必要。
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