连翘为木犀科(Oleaceae)连翘属植物连翘[(Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl)]的干燥果实,在我国中医临床已有两千多年的用药历史,具有清热解毒、消肿散结等功效。连翘叶为连翘的叶子,在当代著作《中华本草》、《中药大辞典》中记载“连翘茎叶,味苦,性寒,功能:清热解毒,主治心肺积热”。研究表明,连翘叶的化学成分与连翘果实具有较好的一致性,只是含量有所差别,如有效成分连翘苷、连翘脂素的含量就高于果实。但连翘叶作为连翘的副产品除少部分在民间制作连翘叶茶饮,大部分都未得到有效利用,造成了资源的极大浪费。因此合理充分开发利用连翘叶资源具有重要意义。现代药理研究表明,连翘叶具有抗炎、保肝等多种活性。连翘脂素作为其主要药效物质基础,由于在天然药用植物中含量相对较少,直接从中提取分离获取难度较大;另外,由于连翘苷作为连翘脂素的糖苷在连翘叶中的含量较高,已有将连翘苷水解转化获得连翘脂素的研究报道。为了寻求一种直接从连翘叶中分离制备连翘脂素的方法,本文开展了利用连翘叶自身酶发酵连翘叶,将连翘叶中连翘苷酶解转化生成连翘脂素的研究,进而通过提取分离纯化技术,制备出了高纯度的连翘脂素单体。本论文期望为连翘脂素的工业化生产和应用提供基础。具体内容如下:1.以4~10月不同月份连翘叶为研究对象,对比分析了连翘叶利用自身酶发酵前后,两种主要木脂素类成分连翘苷和连翘脂素的含量及变化。结果发现,经过发酵,连翘叶主要成分连翘苷可转变成连翘脂素;另外五月份连翘叶中连翘苷含量最高达81.29mg/g,且该月份连翘苷的转化率和连翘脂素的转化得率都较高,连翘脂素含量由4.88mg/g提升至41.38mg/g。该研究结果说明利用连翘叶自身酶发酵法是使连翘苷转化成连翘脂素的有效手段。2.利用正交实验对新鲜连翘叶中连翘苷转化成连翘脂素的发酵条件进行了研究,最佳工艺参数为含水量55%、发酵温度30℃、发酵时间2h时,连翘苷可有效转化成连翘脂素。三次重复放大实验显示连翘脂素的含量平均值为41.60mg/g。由于新鲜连翘叶不易大量储存,所以该工艺较适合当季新采摘的叶子。3.采用响应面分析法,对干燥连翘叶中连翘苷转化成连翘脂素的发酵工艺进行了研究,最佳工艺参数为含水量50%、发酵温度30℃、发酵时间100min时,连翘脂素含量可提高约28倍;放大重复实验显示连翘脂素含量平均为46.40mg/g,与最优条件下的理论值基本接近。4.探索并优化了乙醇回流提取连翘脂素的工艺。最佳提取工艺条件为:乙醇浓度80%、料液比1:15、提取时间30min、提取次数2次。放大重复实验显示连翘脂素的提取得率平均值为3.27%,该工艺重现性较好。另外,对连翘叶发酵品提取物进行了初步纯化,以5倍量水洗3次后连翘脂素含量由10.39%提高至31.65%;继续以5倍量20%乙醇洗2次,连翘脂素的含量可由31.65%提高至39.8%,初步纯化效果明显。5.采用大孔吸附树脂对上述发酵产物进行了进一步纯化研究。首先,以吸附和解吸效果为指标,对大孔吸附树脂进行了筛选,确定HP-20型树脂作为分离材料;通过静态吸附和静态解吸实验确定了吸附和解吸条件:吸附平衡时间2h、解吸时间30min、最佳吸附温度25℃;用不同浓度乙醇梯度洗脱,发现70%乙醇洗脱液能有效富集连翘脂素,且含量可达90%,得率为87.27%。最后,考察了连翘脂素重结晶溶剂,结果显示,甲醇作为重结晶溶剂时,经过三次重结晶操作连翘脂素纯度可达到98%。初步研究结果表明HP-20大孔吸附树脂分离、纯化连翘脂素重现性好,甲醇重结晶能获得高纯度连翘脂素。