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前言结肠癌为常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率在消化系统恶性肿瘤中居前列，因此实现结肠癌的诊断、正确评价预后，进而采取有效的治疗措施意义重大，但目前尚未发现高度特异和高度敏感的相应标志物。P16（Protein 16）是一种细胞周期抑制蛋白，是目前发现的第一个直接抑制恶性肿瘤发生的基因蛋白。CDK4（Cyclin Dependent Kinase 4细胞周期素依赖激酶4）是一种细胞周期蛋白依赖激酶，其含量及活化程度在细胞增殖周期由G1期向S期过渡过程中起限速作用，从而参与细胞周期的调节。大量研究显示P16和CDK4与恶性肿瘤的发生发展密切相关。本研究利用免疫组织化学方法检测结肠癌组织中二者的表达，进一步了解其与结肠癌的关系，揭示其对结肠癌发病原因的意义。实验材料沈阳医学院奉天医院病理室的术后结肠癌和相应的癌旁组织标本50例（癌旁组织经病理证实不存在癌细胞）。HE染色后由病理学医师对组织学类型进行病理诊断。男性26例，女性24例，年龄35岁～80岁，平均58岁。癌组织浸润深度：粘膜层2例，浅肌层13例，深肌层10例，浆膜层25例。分化程度：高分化24例，中分化17例，低分化9例。有淋巴结转移标本27例，无淋巴结转移标本23例。Duke’s分期：A期2例；B期：B112例，B29例；C期：C1期11例，C2期15例；D期1例（肝脏转移）。主要试剂鼠抗人P16单克隆抗体；鼠抗人CDK4单克隆抗体；SP试剂盒、AEC试剂盒。主要仪器光学显微镜（OLYMPUS BX40）、冰箱（容声）、石蜡切片机（SHANDON AS325）、染色缸、微波炉（格兰仕）。实验方法方法采用S-P免疫组织化学染色方法检测结肠癌和癌旁组织中P16和CDK4的表达。统计分析实验数据应用SPSSl1.0软件包，采用x2检验，P＜0.05有统计学意义。实验结果1、结肠癌和癌旁组织中P16、CDK4的表达结肠癌和癌旁组织中P16阳性率分别为42％、74％，两组间比较存在显著差异（P＜0.01）。结肠癌和癌旁组织中CDK4阳性率分别为68％、36％，两组间比较存在显著差异（P＜0.01）。2、结肠癌组织中P16、CDK4表达和Duke’s分期的关系P16在A+B期结肠癌组织中阳性率为56.5％，在C+D期结肠癌组织中阳性率为29.6％，两组间比较存在差异（P＜0.05）。CDK4在A+B期结肠癌组织中阳性率为52.2％，在C+D期结肠癌组织中阳性率为81.5％，两组间比较存在差异（P＜0.05）。3、结肠癌组织中P16、CDK4表达和淋巴结转移的关系P16在有淋巴结转移的结肠癌组织中阳性率为25.9％，在无淋巴结转移的结肠癌组织中阳性率为60.9％，两组间比较存在差异（P＜0.05）。CDK4在有淋巴结转移的结肠癌组织中阳性率为74.1％，在无淋巴结转移的结肠癌组织中阳性率为52.2％，两组间比较存在差异（P＜0.05）。4、结肠癌组织中P16、CDK4的表达与结肠癌分化程度的关系P16在高分化结肠癌组织中阳性率为41.7％，在中低分化结肠癌组织中阳性率为26.9％，两组间比较存在差异（P＜0.05）。CDK4在高分化结肠癌组织中阳性率为54.2％，在中低分化结肠癌组织中阳性率为80.8％，两组间比较存在差异（P＜0.05）。5、结肠癌组织中P16、CDK4的表达与结肠癌组织浸润深度的关系P16在结肠癌组织浸润达粘膜层、肌层中阳性率为60％，在结肠癌组织浸润达浆膜层中阳性率为32％，两组间比较存在差异（P＜0.05）。CDK4在结肠癌组织浸润达粘膜层、肌层中阳性率为52％，在结肠癌组织浸润达浆膜层中阳性率为84％，两组间比较存在差异（P＜0.05）。讨论P16是第一个发现的具有多种肿瘤抑制作用的蛋白质分子，其既是细胞周期的调控分子，又是抑制肿瘤细胞生长的关键因子，其能与cyclin D1竞争性结合CDK4蛋白，特异性地抑制CDK4蛋白的活性，使Rb蛋白处于低磷酸化的状态，抑制细胞的增殖，阻止细胞生长。CDK4是细胞周期G1期重要的调控分子。CDK4蛋白能够特异性地与cyclin D1结合形成复合物，cyclin D1／CDK4复合物可以使Rb蛋白的丝氨酸或苏氨酸残基发生磷酸化。在通常情况下Rb蛋白处于低磷酸化状态，并与转录因子E2F结合。磷酸化后的Rb蛋白可导致E2F的释放，释放出的E2F可以诱导cyclin E的表达，cyclin E与CDK2蛋白形成复合物后又可以使Rb蛋白发生磷酸化，从而促使更多的E2F释放，形成一个正反馈。同时，释放出的E2F又可以刺激其自身基因的转录，从而又形成一个正反馈。由于这两个正反馈，使E2F与cyclin E的活性在G1-S交界点处迅速增高，引起一系列与G1-S转变和S期行进有关的靶分子的表达，促使细胞完成DNA复制。本研究用免疫组织化学方法检测了50例结肠癌和癌旁组织中P16、CDK4的表达。结果表明：P16在结肠癌组织中低表达，与癌旁粘膜的表达相差显著，在癌组织中随着Duke’s分期越高、淋巴结转移、癌组织分化越低、组织浸润深度越深，其阳性表达越低；CDK4在结肠癌组织中阳性表达率显著高于癌旁组织；在癌组织中随着Duke’s分期越高、淋巴结转移、癌组织分化越低、组织浸润深度越深，其阳性表达越高。结论1、P16多表达在细胞核和细胞浆内，结肠癌旁组织中P16阳性表达率明显高于癌组织；随着Duke’s分期越高、淋巴结的转移、癌组织分化程度越低、组织浸润深度越深，P16蛋白阳性表达越来越低。2、CDK4多表达在细胞核内，结肠癌旁组织中CDK4低表达，而结肠癌组织中CDK4高表达；Duke’s分期越高、结肠癌恶性度越高、癌组织分化程度越低、组织浸润深度越深CDK4的阳性表达率越高；伴有淋巴结转移的结肠癌中CDK4阳性率较无淋巴结转移的阳性率高；CDK4可考虑用作结肠癌的肿瘤标志物。