细胞低氧培养系统的研制及人胸腺瘤细胞系的建立

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肿瘤组织内低氧是肿瘤生长微环境的主要特征。虽然国外有成熟的低氧培养箱销售,但由于价格昂贵,使其广泛应用受到限制,国内一些研究人员也建立了很多低氧培养模型,但大多需要手工操作,且不能实时监测培养舱内氧浓度的变化。因此我们利用单片机技术,开发细胞低氧培养系统,实现对培养系统的氧浓度实时监测及严格控制,为细胞低氧的研究提供了稳定的系统。应用PIC16F877单片机作为控制器,通过单片机内置AD模块利用逐次逼近法计算输入的模拟量,并将相应电平信号发送到继电器,换成标准电压后控制氧气和氮气钢瓶的电磁阀开闭,维持培养系统内恒定的氧浓度。通过单片机的控制,建立的低氧培养系统可获得0%~95%任意氧浓度,可满足细胞对不同低氧浓度实验的要求。  本研究利用此低氧培养系统,检测了胸腺瘤细胞系在低氧状态下的部分指标。目前,国内外胸腺瘤伴重症肌无力患者的胸腺瘤细胞系还未见报道,为此,我们从胸腺瘤伴重症肌无力手术患者中,取胸腺瘤组织进行原代培养,探讨人胸腺瘤组织原代培养的方法,明确胸腺瘤组织和胸腺瘤细胞系在体外生长的最佳条件和最适培养基。原代培养成功后,通过各种方法纯化和稳定传代建立一株人胸腺瘤细胞系,命名为Thy0517,为胸腺瘤发病的分子基础及胸腺瘤与重症肌无力的信号传导关系的研究提供了稳定的细胞模型。应用免疫组织化学和免疫细胞化学方法鉴定细胞系来源,倒置显微镜观察此细胞系的生长特征,测定细胞倍增时间,HE染色观察细胞内微细结构,秋水仙素法获得细胞系染色体众数及分布,分析体外裸鼠致瘤能力,并应用低氧培养系统检测细胞系在3%、5%、10%低氧浓度下的体外侵袭能力。
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