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人类基因组计划(Human Genome Project,HGP)是当今生命科学领域内的头号工程,其主要目的是测定人类基因组DNA 3×10~9核苷酸的序列,并确定全部的70,000至100,000个基因。人类基因组序列的测定已经完成,但基因的鉴定及功能阐明仍然是一个巨大的挑战。全长cDNA的克隆和测序将直接导致基因的发现,并有助于基因功能的研究。 富含全长cDNA的高质量cDNA文库的构建对于表达谱基因芯片至关重要。从cDNA文库中克隆到的部分新基因和已知功能基因制备成基因芯片,运用基因芯片对正常人脑和胶质瘤组织基因表达差异进行了研究。用含有4366个基因的芯片对4例胶质瘤标本与正常脑进行了差异表达谱分析,发现4个基因在胶质瘤中表达上调,11个基因在胶质瘤中表达下调。在表达上调或下调的总共15条基因中,0.4%的基因在3例或3例以上的病例中均表现为上调或下调。这些在不同病例标本中表达上下调变化高度一致的基因包括编码蛋白在过氧化物酶体、血清调控、多环芳香烃(PAH)的致癌效应、细胞生长分化、转移、免疫系统功能、凋亡以及细胞骨架重建等中起作用的基因,这些在基因组水平上鉴定出来的胶质瘤组织中特异性差异表达的基因,对于胶质瘤分子基础的研究、诊断和预防起积极的指导作用。 本文还对从cDAN文库中克隆到的两条全长新基因进行了鉴定和初步的功能分析。其中一条为全新的人类PKI基因,它的编码的蛋白与人的PKIα和PKIγ基因编码蛋白氨基酸同源性分别为30%和23%,与小鼠PKIβ基因编码蛋白氨基酸同源性高达74%。该基因编码蛋白具有PKI蛋白共有的两个保守氨基酸序列——即抑制PKA C亚基活性有关的底物类似物位点及出核信号。将该基因克隆到原核表达载体,在大肠杆菌中得到高表达。原核表达蛋白活性测定表明,该蛋白对PKA C亚基磷酸转移酶活性有较强的抑制作用。因此将该基因命名为人的PKIβ基因。Northern杂交显示,该基因有0.7Kb、1.4Kb和1.8Kb三种不同长度的转录本,在不同组织中,转录本的种类和表达量有较大差异。应用RH方法,将该基因定位在人6号染色体6p21-q22区段的D6S304和D6S1712 Marker之间。 另一条新基因为人的环胞菌素A亲合素(Cyclophilin,Cyp)蛋白家族的一个新成员,经国际命名委员会同意,该基因命名为cyclophilin-like gene(PPIL3)。PPIL3基因有两种可变剪切体(PPIL3a和PPIL3b),两种剪切体编码蛋白与线虫的Cyp-10蛋白同源性分别为52%和72%。PPIL3基因由8个外显子组成,在基因组上的跨度达18kb以上,位于染色体2q33的STS人脑}}交质瘤中_条差异表达J浅因的研究摘要markerstSG2762和SHGC一3074之间。RT一PCR发现PPIL3在所有检测的组织中)、’泛表达,在不同组织中,其两种剪切体表达各不相同。PPIL3b表达的重组蛋自经活性鉴定表明,与其他CyP蛋白相似,它也具有依赖于ca,+/ Mg2+的核酸酶活性,其核酸酶活性可被一定浓度的K+例a+抑制,推测PPIL3b在细胞凋亡过程中起着一定的作用。