目的分析不同临床病理特征的HCC亚型的分子表型的特征,初步探讨其不同生物学特征的分子机制,筛选潜在的分子标志物并验证。1.探讨影响HCC根治性切除术后不同时期复发/转移的临床病理因素;2.比较不同肿瘤数目的HCC亚型的蛋白质组学的特征,初步了解不同肿瘤数目的HCC亚型生物学行为差异的分子基础,寻找潜在的分子标志物并验证;3.比较不同肿瘤大小的HCC亚型的蛋白质组学的特征,初步了解不同肿瘤大小的HCC亚型生物学行为差异的分子基础,寻找潜在的分子标志物并验证;4.探讨HK2表达情况与HCC根治性切除术后复发/转移的关系。方法1.回顾性分析HCC患者根治性切除术后的复发/转移情况,以12项相关的临床病理因素为变量,进行单因素和多因素logistic回归分析,按不同复发/转移时期分析其影响因素。2.iTRAQ标记的定量蛋白质组学的方法,比较单发性和多发性HCC的全体蛋白质组的特征,筛选差异表达蛋白,并应用生物信息学技术分析其分子功能、信号通路等;筛选出不同肿瘤数目的HCC亚型潜在的分子标志物并在m RNA和蛋白水平进行验证。3.iTRAQ标记的定量蛋白质组学的方法,比较微小肝癌、小肝癌、大肝癌、巨大肝癌的全体蛋白质组的特征,筛选差异表达蛋白,并应用生物信息学技术分析其分子功能、信号通路等;筛选不同肿瘤大小的HCC亚型的潜在的分子标志物并在m RNA和蛋白水平进行验证。并对差异蛋白MT1G在HCC中的作用进行初步的分子机制的研究。4.采用Western Blot检测差异表达蛋白HK2在HCC癌组织样本中的表达情况,并与HCC复发/转移的相关临床病理因素进行比较研究。回顾性分析HCC患者根治性切除术后的复发/转移情况,以临床病理因素和HK2表达情况为变量,进行单因素和多因素logistic回归分析,分析其影响因素。结果1.HCC根治性切除术后12个月内复发/转移的独立危险因素为发现方式、术前血清AFP值、肿瘤大小和癌细胞分化程度;术后12~24个月复发/转移的独立危险因素为术前血清AFP值和肿瘤数目;术后>24个月复发/转移的独立危险因素为术前血清AFP值、肿瘤大小、肿瘤包膜完整性、癌细胞分化程度。2.在多发性HCC(MC组)和单发性HCC(SC组)的癌组织中,与相应的癌旁组织(MN组和SN组)比较,分别鉴定出107种和330种差异蛋白。在MC组,差异蛋白主要集中在UBC信号通路和NFκB信号通路;而在SC组,差异蛋白主要集中于ERK信号通路和NFκB信号通路。HSD17B13只在MC组下调,而HK2只在SC组上调。3.将癌组织和相应的癌旁组织相比较,在微小肝癌、小肝癌、大肝癌、巨大肝癌分别鉴定出88种、69种、118种和215种差异蛋白。在各个不同肿瘤大小的HCC亚型中,ERK1/2和AKT信号通路的变化在肿瘤发生、发展中均发挥了重要作用。在微小肝癌和巨大肝癌,发现了特有的信号通路的变化。确认了一组与HCC的肿瘤大小显著相关的差异蛋白。MT1G在HCC癌组织中表达降低,与肿瘤大小呈负相关,其过表达可以抑制HCC细胞增殖,促进细胞凋亡。4.HK2表达情况与HCC的发现方式、镜下脉管癌栓、肿瘤大小、肿瘤数目相关。HK2高表达组术后累积生存率显著低于低表达组。HK2为HCC根治性切除术后复发/转移的独立危险因素。结论1.HCC根治性切除术后不同时期复发/转移的影响因素不同。肿瘤数目和肿瘤大小是影响HCC术后不同时期复发/转移的独立危险因素。2.不同肿瘤数目的HCC亚型有着不同的分子学特征和信号通路。筛选并鉴定出HSD17B13和HK2两种差异蛋白,可做为不同肿瘤数目的HCC亚型的潜在的分子标志物。3.不同肿瘤大小的HCC亚型具有不同的分子学特征和信号通路。发现了与HCC的肿瘤大小密切相关的一组差异蛋白,可做为不同肿瘤大小HCC亚型的潜在的分子标志物。差异蛋白MT1G可能通过调节AKT信号通路抑制HCC的增殖。4.HK2表达水平与HCC根治性切除术后的预后密切相关,可作为判断HCC复发/转移和预后的一个有效的分子标志物。