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活的非可培养(Viable but nonculturable, VBNC)状态作为微生物学的一个全新概念,近二十多年受到了微生物界的极大关注。但是对于VBNC状态致病菌的复苏情况、致病机制等方面的研究报道很少。本文对迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)CW7、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)VIB799、FYZ8621.4、溶藻胶弧菌(Vibrio alginolyticus)VIB283、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)CW1、CW4几种常见致病菌活的非可培养状态的进入、复苏及进入VBNC状态后的形态变化、毒力情况进行了研究。用吖啶橙染色荧光显微镜直接计数法(AODC)、活菌直接计数法(DVC)和涂布平板法(PC)研究这几种致病菌能否进入VBNC状态。研究发现,在低温(4℃)寡营养条件下,这几种致病菌进入VBNC状态的时间分别为:迟缓爱德华氏菌CW7 28 d;副溶血弧菌VIB799和FYZ8621.4分别为30 d和88 d;溶藻胶弧菌VIB283为90 d;鳗弧菌CW1和CW4分别为324 d和266 d。在实验期间,这几种致病菌的存活曲线发生了相似的变化,当实验菌株进入VBNC状态时,它们的总菌数与刚接种的浓度相比几乎没有太大变化,活菌数比总菌数低两到三个数量级,并且稳定在这一较低的水平,可培养细菌数为零。用荧光显微镜、扫描电镜及流式细胞仪对这几种致病菌的正常状态、VBNC状态及复苏状态进行的研究表明,进入VBNC状态后,这几种菌在形态上发生了一致的变化,即都由原来的杆状、短杆状或弧状变为球状,并且体积比正常状态的细胞明显缩小;流式细胞仪研究还发现,复苏状态的副溶血弧菌VIB799及溶藻胶弧菌VIB283在形态上分别与其正常状态几乎没有差异,复苏状态的迟缓爱德华氏菌CW7略小于正常状态的迟缓爱德华氏菌CW7。对迟缓爱德华氏菌CW7、副溶血弧菌VIB799、溶藻胶弧菌VIB283分别用升温复苏法、添加营养物质升温复苏法及鸡胚复苏法进行了复苏,研究发现采用添加营养物质升温复苏法及鸡胚复苏法对迟缓爱德华氏菌CW7实现了复苏,其复苏时间分别是8 d和6 d;采用添加营养物质升温复苏法对副溶血弧菌VIB799实现了复苏,其复苏时间为2 d;采用升温复苏法及添加营养物质升温复苏法对溶藻胶弧菌VIB283实现了复苏,其复苏时间为8 d和16 h。将VBNC状态及复苏状态的迟缓爱德华氏菌CW7注射大菱鲆进行毒力测定发现,注射了VBNC状态的迟缓爱德华氏菌CW7细胞的大菱鲆在实验期间未出现发病或死亡现象,在这些大菱鲆体内也没有分离出迟缓爱德华氏菌CW7,而注射了复苏状态的迟缓爱德华氏菌CW7的大菱鲆在7 d时出现死亡现象。结果显示,VBNC状态的迟缓爱德华氏菌可能保持了它的致病潜能,伴随着复苏的实现,它的致病力也得以恢复。对正常状态的、升温复苏得到的及添加营养物质升温复苏得到的溶藻胶弧菌VIB283细胞借助于API 20E进行生理生化检测发现,与正常细胞及升温复苏得到的细胞相比,通过添加营养物质升温复苏得到的溶藻胶弧菌VIB283细胞增加了利用柠檬酸盐的能力。