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题目:银杏内酯B(ginkgo lide B,GB)对胚胎大鼠中脑神经细胞保护作用及其机制的研究。目的:通过银杏内酯B对体外培养胚胎大鼠中脑神经细胞生长发育及其对中脑神经细胞损伤的保护作用机制的研究,为临床应用GB治疗中脑神经损伤相关疾病提供理论依据。方法:通过14d的Wistar胚胎大鼠中脑神经细胞的体外原代培养以及海人藻酸(kainic acid,KA)干预造成胚胎大鼠中脑神经细胞损伤模型;用NGF作阳性药物对比,采用台盼蓝测定细胞活力;MTT方法检测神经细胞存活率;SP法免疫组化染色测定中脑神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)表达;黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活力;硫代巴比妥酸法测定中脑神经细胞的丙二醛(MDA)的含量;硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)含量;改良法Lowry测定中脑神经细胞相对蛋白质含量;及Leica采集图像进行细胞形态学观察,初步探讨GB促进中脑神经细胞生长、分化和保护作用及其机制。结果:1、GB对中脑神经细胞生长的影响1.1中脑神经细胞存活率:中脑神经细胞经1d、2d、3d、4d培养后,NGF组,GB组与对照组相比细胞存活率在第3d(P<0.05)、4d明显增高(P<0.01),NGF组,GB组之间无显著性差异;KA组在2d开始与对照组相比明显下降(P<0.05),NGF和GB可逆转KA降低存活率的作用,且随着GB剂量的增加,逆转作用增强(P<0.05)。1.2中脑神经细胞集落分化率:NGF组(133%),GB组(134%)中脑神经在培养10天后,细胞集落分化率与对照组(100%)相比明显升高(P<0.01)。KA(29.4%)可明显抑制细胞集落分化率(P<0.01)。NGF和GB可部分逆转KA的抑制作用(86.5%、82.1%,与KA组比P<0.01)。2、GB对中脑神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)表达的影响:各组中脑神经细胞培养均至10d,观察以下指标:2.1 NSE阳性细胞数:,NGF组和GB组阳性细胞数明显大于对照组(P<0.01);KA组阳性细胞数明显减少,与对照组相比P<0.01,有明显的抑制倾向。GB+KA组和NGF+KA组阳性细胞数明显大于KA组(P<0.01)。2.2 NSE阳性细胞胞体平均面积:NGF组为1207.7μm2,GB组为1167.7μm2两组均大于对照组1148.6μm2(P<0.05)。NGF组和GB组无显著性差异。KA组的阳性细胞平均面积为132.2μm2明显小于对照组(P<0.01)。GB+KA组和NGF+KA组阳性细胞面积小于对照组,但大于KA组(P<0.01)。2.3 NSE阳性细胞突起数/细胞:NGF组为3.92个/细胞,GB组为3.96个/细胞均高于对照组(P<0.01); GB+KA组和NGF+KA组分别为2.05个/细胞和2.38个/细胞,明显高于KA组1.03个/细胞(P<0.01)。2.4 NSE阳性细胞最长突起长度:GB组为91.28μm,NGF组为88.54μm,均大于对照组79.44μm(P<0.01);GB+KA组和NGF+KA组分别为62.46μm和62.35μm大于KA组32.56μm(P<0.01)。3、GB对中脑神经细胞NO、MDA、蛋白质含量及SOD活性的影响GB(25-100 mg/L)能剂量依赖性地抑制KA引起的神经细胞损伤。GB(50 mg/L)组在中脑神经细胞培养第10天NO、MDA含量与对照组相当;SOD和蛋白质含量高于对照组。NGF(50mg/L)+KA(100μmol/L)组,GB(50 mg/L)+KA(100μmol/L)组NO、MDA含量均小于KA(100μmol/L)组;SOD和蛋白质含量高于KA(100μmol/L)组。有统计学意义。结论:GB对中脑神经的生长发育以及对KA引起的损伤有保护作用。该作用可能与其促进糖代谢过程中NSE酶蛋白的表达相关,也与其可使中脑神经损伤过程中氧自由基平衡恢复有关。本研究结果为GB用于防治中脑损伤提供理论依据。