论文部分内容阅读
疱疹病毒颗粒结构由四部分构成:DNA核心,衣壳,间质蛋白层和囊膜。间质蛋白层是疱疹病毒特有的结构,位于病毒核衣壳和囊膜之间,在病毒生命周期中发挥了非常重要的作用。鼠疱疹病毒68(MHV-68)是γ疱疹病毒的一个成员,与两种人类致瘤疱疹病毒卡波西肉瘤相关病毒(KSHV)和EB病毒(EBV)高度同源。MHV-68 ORF45是γ疱疹病毒中特有的间质蛋白,但是ORF45在病毒形态发生过程中发挥了怎样的功能是未知的。 在本论文中,我们首先观察了ORF45的亚细胞定位,发现ORF45在细胞核和细胞质中均有分布。免疫电镜结果显示,ORF45是在细胞质中病毒间质化位置并有宿主来源的囊泡处被大量包裹进入病毒颗粒的。电镜结果表明,ORF45的缺失不仅导致了病毒衣壳核释放效率的降低,而且完全阻滞了病毒颗粒在细胞质中的成熟,说明ORF45对于MHV-68病毒颗粒的形态发生是必需的。 病毒颗粒的组装释放是由一系列蛋白与蛋白的相互作用介导的。为探索ORF45参与病毒形态发生过程的分子机制,我们在病毒感染情况下确认了ORF45与间质蛋白ORF33具有相互作用。我们实验室之前发现ORF33的缺失影响了病毒衣壳的核释放,在本论文中我们通过构建orf45和orf33双缺失的MHV-68基因组,发现同时缺失ORF45与ORF33的突变病毒无法完成核释放。通过构建截短体我们发现ORF45 C端23个氨基酸对二者相互作用至关重要,而且病毒基因组上ORF45 C端23个氨基酸缺失之后,不能产生具有感染性的病毒粒子,进一步电镜观察病毒形态发生过程,我们发现ORF45 C端23个氨基酸对病毒在细胞质中的成熟是必要的。另一方面,通过构建截短体我们发现ORF33 N端17个氨基酸对二者相互作用至关重要,而且病毒基因组上缺失了ORF33 N端17个氨基酸后虽然不影响病毒晚期基因的表达,但是对产生具有感染性的病毒粒子是必要的。因此,我们的数据提示ORF45与ORF33的相互作用在病毒的细胞质成熟方面发挥了至关重要的功能。 另外,我们分析了ORF45与核释放复合体ORF67、ORF69的相互作用。通过免疫共沉淀实验我们发现ORF45与核释放复合体ORF67、ORF69都具有相互作用,并且可以在与ORF67和ORF69共同存在的情况下被招募到核边缘,且ORF45的71-130位氨基酸序列对于其结合核释放复合体至关重要。综上所述,我们的研究结果对提示γ疱疹病毒中ORF45同源物在病毒包装释放过程中如何发挥其功能有一定的指导作用。