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抑制素(INH)是一种主要由性腺产生的糖蛋白激素,组成INH的α-亚基和β-亚基(β_A-亚基和β_B-亚基)通过二硫键结合在一起。在体内,INH主要抑制垂体促性腺激素FSH的合成和分泌。本课题研究了萧山鸡INH特异性的α-亚基成熟区cDNA的克隆及其在表达菌株BL21(DE3)中的融合表达情况,希望为今后开展融合表达产物对家禽繁殖率影响的研究提供前期的理论依据。 从萧山鸡卵巢中采集各级卵泡颗粒细胞,采用总RNA抽提试剂盒抽取卵泡总RNA,经逆转录酶(RT-PCR酶混合物)的作用,获得鸡INH各亚基成熟区的cDNA片段,以pGEM-T Easy Vector和pUCm-T Vector为载体,克隆α-亚基、β_A-亚基和β_B-亚基的cDNA,并进行序列测定。将所获得的各亚基cDNA序列与GenBank上登录的其它动物INH各亚基相应cDNA序列进行比较。比较结果显示,萧山鸡INH α-亚基成熟区cDNA与鸡(仙居鸡,白莱航鸡和某鸡Gallus gallus)、哺乳动物牛、猪、羊、马、鼠以及人类的核苷酸同源性分别为100%~98%,71%~98%,73%,71%,71%,68%和71%;β_A-亚基成熟区cDNA与鸡(仙居鸡,白莱航鸡)、哺乳动物牛、猪、羊、鼠及人类INH的同源性分别达到99%,85%,83%,84%,84%,85%;而β_B-亚基与鸡(仙居鸡,白莱航鸡)、牛、猪、鼠、人类INHβ_B-亚基成熟区表现出99%,81%,81%,81%和83%的核苷酸同源性。这表明,INH各亚基基因在进化过程中较为保守。 将筛选到的鸡INHα-亚基成熟区cDNA的阳性克隆子经双酶切后,连结入经同样内切酶Sal I和Nco I消化的表达载体pET 30α Vector中,构建重组表达载体INH α-pET 30α,将筛选到的重组表达载体转化入表达菌株BL21(DE3)中,在低温条件下(30℃)用IPTG诱导其进行表达,并用反复冻融法纯化目的蛋白,融合表达产物的SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,采用低温诱导表达,并用反复冻融法获得了融合表达产物。这充分说明,尝试用这种方法获取大量INH免疫原的途径是可行的。