论文部分内容阅读
目的:研究益肺宣肺降浊方对血管性痴呆大鼠行为学改变,海马神经元凋亡及PI3K/AKT信号通路关键蛋白表达的影响,探讨益肺宣肺降浊方防治VD的分子作用机制。方法:将66只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组及益肺宣肺降浊方高、中、低剂量组,每组11只,采用永久性双侧颈总动脉结扎（2-VO）大鼠作为VD大鼠模型。假手术组和模型组给同等体积的生理盐水灌胃,益肺宣肺降浊方高、中、低剂量组给药剂量分别为5g、2.5g、1.5g·kg-1,尼莫地平组给药剂量8mg·kg-1,各组大鼠每日灌胃一次,持续给药4w后进行指标检测。给药结束后第天进行Morris水迷宫空间航行定位测试大鼠的逃避潜伏期,第6天撤掉逃生平台测试空间探索实验。Morris水迷宫结束后,断头取各组大鼠海马组织,进行HE染色观察大鼠海马CA1区神经元形态改变,TUNEL检测观察大鼠海马CA1区神经元凋亡情况,Western Blot检测p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果:（1）Morris水迷宫空间航行定位及空间探索实验结果,与假手术组相比,模型组大鼠逃避潜伏期明显增加（P<0.01）,跨越逃生平台的次数减少（P<0.01）。与模型组相比,尼莫地平组、益肺宣肺降浊方高剂量组和中剂量组逃避潜伏期明显降低（P<0.05）,跨越逃生平台的次数增加（P<0.05）,益肺宣肺降浊方高剂量组与尼莫地平组差异无统计学意义（P>0.05）。（2）TUNEL检测结果,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠海马神经元凋亡率明显增加（P<0.01）。HE染色结果显示,模型组大鼠海马CA1区细胞排列极其紊乱,正常神经元减少,细胞形态不规则,胞质稀少,胞核深染、固缩,核浆界限模糊;凋亡神经元数量明显增多,呈三角形或不规则形,核仁不明显。与模型组相比,尼莫地平组、益肺宣肺降浊方高剂量组和中剂量组海马神经元凋亡率降低（P<0.05）,并且海马神经元病理改变减轻,尼莫地平组和益肺宣肺降浊方高剂量组差异无统计学意义（P>0.05）。（3）Western Blot检测结果显示,与假手术组相比,模型组大鼠p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平显著降低（P<0.01）;与模型组相比,尼莫地平组、益肺宣肺降浊方高剂量组和中剂量组p-PI3K和p-Akt表达升高（P<0.05）,尼莫地平组和益肺宣肺降浊方高剂量组p-PI3K和p-Akt表达差异无统计学意义（P>0.05）。各组大鼠Akt表达水平无统计学差异（P>0.05）。结论:实验通过2-VO方法成功地建立了慢性脑供血不足致VD大鼠模型,经益肺宣肺降浊方干预后VD大鼠学习及记忆能力得到改善能力,其作用机制可能是益肺宣肺降浊方激活PI3K/Akt信号通路抑制了海马神经元的凋亡,从而提高了VD大鼠的学习及记忆能力。