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三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）是乳腺癌中最具侵袭性的分子亚型。其特征是孕激素受体（progesterone receptor,PR）、雌激素受体（estrogen receptor,ER）和人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor 2,HER2）不表达。国内外目前主要采用放、化疗的方式进行治疗,但毒副作用明显,而且化疗药物容易产生耐药性。因此,迫切需要使用更有效、毒性更小的药物来治疗TNBC。中药在肿瘤的预防和治疗方面具有独特的优势,中药复方中蕴含多种活性成分,可通过多个靶点、多种途径发挥增效作用,且作用温和。华蟾素注射液（cinobufacini injection,CI）是由中华大蟾蜍皮加工制成的,微黄色或淡黄色的水溶性制剂,具有抗癌谱广、高效低毒的特点。临床上用于包括TNBC在内的多种肿瘤的治疗,但其分子机制及作用靶点尚不明确。Pin1-YAP/TAZ是近年来研发抗肿瘤药物的热点信号通路。其中,肽基脯氨酰顺反异构酶NIMA相互作用蛋白1（peptidylprolyl cis-trans isomerase NIMA-interacting 1,Pin1）被认为是一种新的诊断TNBC的生物标志物,Yes相关蛋白（Yes-Associated Protein,YAP）/PDZ结合域的转录共刺激因子（transcriptional co-activator with PDZbinding motif,TAZ）,作为Hippo通路的两个核心成分在肿瘤发生和耐药性中起关键作用。有研究发现,在TNBC中Pin1可以与YAP/TAZ相互作用,提示靶向Pin1-YAP/TAZ信号通路的药物,可能有助于TNBC的临床治疗。首先,研究华蟾素注射液在体内外对TNBC的影响。动物实验表明,华蟾素注射液对荷瘤小鼠肿瘤起到抑制生长的作用,与阿霉素相比,华蟾素注射液对小鼠的体重、脏器没有影响,提示药物的毒副作用小;TNBC细胞的CCK8、克隆形成实验表明,华蟾素注射液可以抑制人源的MDA-MB-231细胞和鼠源的4T1细胞的增殖,且具有一定的时间、剂量依赖性;通过流式细胞分析术进行细胞凋亡、周期检测,结果表明华蟾素注射液可以诱导TNBC细胞周期阻滞,使MDA-MB-231细胞在G2/M期受到阻滞,4T1细胞在S期受到阻滞,最终诱导TNBC细胞发生凋亡;western blot的结果证实,华蟾素注射液通过下调CDK1、CDK2和Bcl-2/Bax蛋白水平,诱导细胞发生周期阻滞和凋亡。其次,基于癌症基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库进行临床数据挖掘,结果表明,与正常组织相比,Pin1和TAZ在乳腺癌中过表达;与其他乳腺癌相比,晚期乳腺癌中Pin1和TAZ的表达水平升高,在第4期最为显著;与正常组织以及其他乳腺癌亚型的组织相比,Pin1和TAZ在TNBC中表达更高,表达水平与生存率负相关。尽管YAP的表达在TNBC患者中不是最高的,但在TNBC患者中,YAP表达越高,患者生存率也越低。利用免疫组织化学法将虚拟数据与现实世界的真实病例对接,结果显示,TNBC组织中Pin1、YAP和TAZ的阳性表达率分别为60%、56%和56%,与癌旁组织相比,在TNBC组织中Pin1和TAZ阳性表达率显著升高（P＜0.05）,YAP升高,但无显著差异（P＞0.05）,Pin1、YAP、TAZ的表达与一些临床病理特征无关,如肿瘤分期、有无淋巴转移等（P＞0.05）。相关性分析表明,TNBC患者组织中Pin1与YAP（r=0.577,P＜0.05）、TAZ（r=0.645,P＜0.05）的表达均呈显著正相关关系。为了进一步明确Pin1与YAP、TAZ的相关性,在TNBC细胞采用si RNA的方法敲减Pin1后,YAP、TAZ的表达明显下调。上述实验结果提示,Pin1-YAP/TAZ是TNBC的核心信号通路之一。最后,研究华蟾素注射液抗TNBC的分子机制。RNA-seq结果表明,华蟾素注射液可以影响TNBC中的多种信号通路,其抗TNBC的作用机制可能与调控Pin1-YAP/TAZ信号通路相关。Western blot结果显示华蟾素注射液不仅能够下调TNBC细胞系MDA-MB-231和4T1细胞中Pin1、YAP、TAZ的表达,还可以下调TNBC肿瘤中Pin1、YAP、TAZ的表达,这些结果表明华蟾素注射液通过抑制Pin1-YAP/TAZ信号通路,发挥抗TNBC的作用。综上所述,我们采用体内、外实验,明确了华蟾素注射液通过诱导细胞周期阻滞和凋亡发挥抗TNBC的药效;综合运用TCGA数据库和转录组学技术,探讨了其潜在的分子机制;本研究首次聚焦华蟾素注射液下调Pin1-YAP/TAZ信号通路发挥抗TNBC的作用,凸显了Pin1-YAP/TAZ信号通路在TNBC中发生和发展的重要性,为中药治疗TNBC提供了新策略。