论文部分内容阅读
目的： 对产于我国广东连南、连山等瑶胞聚居区的冬青科(Ilex latifolia)的变种植物—枸骨叶(Ilex latifolia Thunb)五种化学提取成分(样品Ⅰ、Ⅰ_Ⅰ、Ⅰ_Ⅱ、Ⅰ_Ⅲ、Ⅱ)进行抗真菌和调节T淋巴细胞活化增殖的功能研究。 方法： (1) 建立MTT比色法测定抗真菌最低抑菌浓度(MIC)。应用NCCLS推荐真菌药敏实验方法测定两性霉素B和伊曲康唑对5种常见真菌(白色念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、申克孢子丝菌和石膏样小孢子癣菌)的最低抑菌浓度(MIC)，终点判定分别采用NCCLS推荐的肉眼法和MTT比色法，对两法进行比较； (2) 应用NCCLS推荐真菌药敏实验方法测定枸骨叶五种不同的溶媒提取产物(样品Ⅰ、Ⅰ_Ⅰ、Ⅰ_Ⅱ、Ⅰ_Ⅲ、Ⅱ)对5种常见真菌(白色念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、申克孢子丝菌和石膏样小孢予癣菌)的抗真菌效果，终点判定采用MTT比色法； (3) 用透射电镜观察与样品Ⅰ_Ⅰ共同孵育过的白色念珠菌的超微结构，探讨枸骨叶抑制真菌的作用机制； (4) 采用MTT法测定枸骨叶五种不同的溶媒提取产物(样品Ⅰ、Ⅰ_Ⅰ、Ⅰ_Ⅱ、Ⅰ_Ⅲ、Ⅱ)对ConA体外刺激小鼠脾淋巴细胞增殖作用的影响； (5) 双色荧光标记法流式细胞术测定样品Ⅰ、Ⅰ_Ⅰ对ConA体外诱导的小鼠T细胞活化因子CD69表达的影响。 结果： (1) MTT比色法应用于NCCLS推荐真菌药敏实验方法的终点判定，结果与常规肉眼观察法一致，MTT法测得的A值随着药物浓度的增长而降低。 (2) 样品Ⅰ、Ⅰ_Ⅰ、Ⅰ_Ⅱ对白色念珠菌和光滑念珠菌的均有很好的抑制效果，与DMSO溶剂对照相比，有效最小浓度分别是31.25μg／ml、7.81μg／ml、31.25μg／ml和7.81μg／ml、31.25μg／ml、7.81μg／ml；样品Ⅰ_Ⅲ、Ⅱ对白色念珠菌和光滑念珠菌没有抑制作用。样品Ⅰ、Ⅰ_Ⅰ、Ⅰ_Ⅱ、Ⅰ_Ⅲ、Ⅱ对季也蒙念珠菌、申克孢子丝菌和石膏样小孢子癣菌均没有抑制作用。拘骨叶抗真菌及体外对小鼠T淋巴细胞活化增殖作用的研究 (3)电镜下观察，与构骨叶样品11共孵育(200卜g/tnl，35oC，24h)后的白色念珠菌细胞壁局部增厚溶解，与细胞膜分离，胞浆内结构受损，出现高电子的凝集块和电子薄区，基质溶解，空泡化，线粒体肿胀，坏死。 (4)样品I(25林g/ml组、50林g/ml组、1 00林g/ml组)、样品I，(1 2.5林g/ml组、25林g/ml组、50林留ml组、1 00林g/ml组)和样品I，;(50林g/ml组、1 00林g/ml组、)均可抑制ConA体外刺激小鼠脾淋巴细胞的增殖(P<0.01)，呈剂量依赖关系。样品11，，(6.25林留ml组、12.5林留ml组、25林g/ml组、50林岁ml组、100林岁ml组)和样品11(6.25林g/ml组、12.5林留ml组、25卜留ml组、50林g/ml组、100林g/ml组)均对ConA体外刺激小鼠脾淋巴细胞的增殖没有明显影响(P>0.05)。 (5)样品I(25林g/ml组、50林g/ml组、1 00林g/ml组)和样品I;(1 2.5林g/ml组、25林g/ml组、50林留ml组、1 00林g/ml组)均可抑制Co叭体外诱导的小鼠T细胞活化因子CD69的表达(P<0.01)，呈剂量依赖关系。结论: (1) MTT比色法应用于NCCLS推荐真菌药敏实验方法的终点判定，是可行且更为客观准确的一种方法; (2)构骨叶对念珠菌有抑制作用; (3)构骨叶可通过破坏真菌的细胞壁和细胞膜而杀灭真菌。 (4)构骨叶可抑制ConA体外诱导的小鼠T淋巴细胞增殖; (5)构骨叶可抑制Co叭体外诱导的小鼠T淋巴细胞活化。