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目的：通过大蒜、鱼腥草、吴茱萸、云南普洱茶、薄荷对幽门螺杆菌的体外抑菌实验和体内动物实验，筛选出抗幽门螺杆菌(H.Pylori)的天然药物及其最佳组合方案。为人们在日常生活中选择食用这些天然药物达到大规模人群防治H.Pylori感染和进一步开发与临床应用奠定实验基础和理论依据。 方法：(1)采用琼脂稀释药敏法进行紫皮独头大蒜汁、鱼腥草水煎剂、吴茱萸水煎剂、普洱茶水煎剂和薄荷水煎剂等五种天然药物的抗H.Pylori的抑菌实验，检测其对云南菌株和标准菌株NCTC11639的最低抑菌浓度(MIC)；(2)对筛选出来的天然药物进行配伍、组合，得出最佳组合方案的抑菌浓度；(3)用cagA基因及vacA基因均阳性的3-21菌株建立H.Pylori感染BALB／c小鼠动物模型；(4)用RFLP-PCR方法鉴定小鼠感染菌株为定植所用菌株3-21。(5)用筛选出来的天然药物和组合方案治疗H.Pylori感染小鼠，观察抗H.Pylori天然药物及最佳组合方案的疗效。 结果：1、五种天然药物的最低抑菌浓度(MIC)为：紫皮独头大蒜汁0.39mg／ml；鱼腥草水煎剂0.25g／ml；吴茱萸水煎剂0.5g／ml；普洱茶水煎剂1：1浓度有轻度抑菌作用；薄荷水煎剂无抑菌作用。前3种天然药物的抑菌率均为100％。均无耐药菌株出现。 2、筛选出最佳抑H.Pylori组合方案为：联合天然药物中大蒜最适宜浓度为1／2MIC，鱼腥草为1／2 MIC，吴茱萸为1MIC，即大蒜汁0.20g／ml：鱼腥草水煎剂0.125g／ml：吴茱萸水煎剂0.5g／ml=1：1：1，并联合药物组中主从药的序列是大蒜汁(86.663)—吴茱萸(30.84)—鱼腥草(24.454)。 .…_.“_—一一一一一一鱼圭研塞李诊吝二~一~.「_ 3、本实验采用经筛选的云南地区临床分离培养毒株(CagA+、vacA+)3一21菌 株，灌胃BALB/c小鼠4周后，病理模型组5只感染的小鼠胃勃膜经尿素酶试 验、细菌学培养、组织学检查和分子生物学(灯LP一PCR方法)测定，其感染 率为100%(5/5)，且定植前后菌株为同一菌株;正常对照组未见HPylori生 长，感染率为0%(0/5)，两者相比有显著性差异(P<0.01)。 4、将大蒜汁(0 .78mg/m1)、鱼腥草水煎剂(0 .59/m1)，吴茱英水煎剂(l .09加11) 及三种天然药物的最佳联合方案(大蒜汁0.399/m1:鱼腥草水煎剂0.259/m1: 吴茱英水煎剂1.馆/m1==1:1:l)对HPylori感染小鼠进行治疗，其治愈率分 别为60.00%(18/30)，46.67%(14/30)，40%(12/30)、83.33%(25/30)，得 到了满意的结果，且均无不良反应。大蒜汁、鱼腥草水煎剂，吴茱英水煎剂及 最佳联合方案组治疗HPylori的疗效与病理模型对照组、正常对照组比较均有 显著性差异(P<0.05)。最佳联合方案组与大蒜汁组、鱼腥草水煎剂，吴茱英 水煎剂组治疗率有显著性差异(P<0.05)。结论:1、本研究用琼脂稀释法进行的体外试验得出紫皮独头大蒜汁，鱼腥草水煎剂， 吴茱英水煎剂有较好的抑制互为tori作用，尤以紫皮独头大蒜汁抑菌效果为 好。普洱茶水煎剂有较弱的抑制HPylori作用;薄荷水煎剂无抑制H和lori 作用。 2、本研究筛选的最佳组合方案浓度为大蒜汁(1/Zxo.399/ml)、鱼腥草水煎剂 (1/2x0.259/ml)、吴茱英水煎剂(lx0.59/ml)按1:1:l混匀;并得出联 合药物组中主从药的序列是大蒜汁(86.663)一吴茱英(30.84)一鱼腥草 (24.454)。其中鱼腥草水煎剂、吴茱英水煎剂、普洱茶水煎剂的最低抑HPylori 浓度及其最佳组合方案浓度在国内外尚属首次报道。 3、体内实验表明大蒜、鱼腥草、吴茱英对H为tori感染BALB/c小鼠的根除 率分别为60.00%、46.67%、40.00%，三药联合治疗根除率为83.33%，联合治 疗疗效明显优于单剂治疗(P均<0 .05)。 4、，体内外实验均表明大蒜、鱼腥草、吴茱英对H巧lori有明显抑制作用，三 药联合的疗效优于单剂的疗效，是一抗万为才口ri的良好组合方案，并有助于减 少药物耐药性的发生。这将为天然药物的开发和临床应用提供实验依据。用于 大规模人群防治，将有着不可估量的社会效益和经济效益。第2页硕士研究生论文 5、国内外首次应用云南cagA+、vacA+的单株并经过多次传代(>10次)的菌 株成功定植BALB/c小鼠。这种在普通饲养条件下建立的小鼠动物模型既降低 实验成本，又能因地制宜，可广泛推广应用于药物疗效、疫苗研制等方面的研 究。 6、PCR一盯LP法是鉴定动物模型中HPytori定植的最特异和快速、简便的一 种方法，可望代替细菌培养、组织病理学及尿素酶试验在科研和临床上普遍推 广和应用。