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目的:据最新数据显示,乳腺恶性肿瘤作为损害女性健康的第一杀手,且具有年轻化趋势,已成为当前社会关注的焦点。近十年中,虽然乳腺癌的化疗方案不断改进和完善,死亡率较先前已降低,但多药耐药的出现导致部分患者化疗失败,增加了患者致死率。现研究发现周期阻滞和凋亡诱导是逆转耐药的新篇章。那么作为乳腺癌逆转剂的补骨脂素是否用也是通过以上作用发挥其逆转效应的呢?这是本实验的验证目标。方法:1.经细胞毒性试验MTT检测,耐药细胞株MCF-7/ADR的耐药活性,并进一步检测补骨脂素对其增殖抑制性。2.用流式仪检测不同浓度补骨脂素作用48小时后,乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR细胞凋亡和细胞周期的影响。3.用实时荧光定量PCR检测以补骨脂素的IC10浓度作为实验组作用48小时后,基因p53, bcl-2和caspase-3的变化,并通过琼脂糖凝胶电泳实验行进一步检测。结果:1.经MTT实验我们测的补骨脂素可抑制乳腺癌细胞的增值,各浓度组和对照组相比差异均有统计学意义(F=140.69,P<0.05)。其IC50值为18.785± 1.253 μg/ml。为保证实验的准确性,分别选择4 μg/ml低浓度剂量组、8μg/ml中等剂量组及12 μg/ml高等剂量组作为实验组,用来进行以下试验。2.不同浓度补骨脂素作用48 h后,检测显示补骨脂素阻滞乳腺癌耐药细胞周期于G0/G1期,抑制细胞进入S期,故其比例下降,于对照组相比差异显著(FG0/G1=1272.3.25 ,FS=134.27, p均<0.05)。说明补骨脂素阻滞细胞在G0/G1期,细胞增值活动受到抑制。然而流式凋亡实验发现,早期自然凋亡率为(0.23±0.12) %。在 4 μg/ml 浓度下为(7.49±0.89) %, 8 μg/ml 浓度下为(7.56±0.78) %,12 μg/ml浓度下为(12.18±1.18) %,与对照组相比差异较为显著有统计学意义(F=18.33 P<0.05),但各浓度组间无明显差异(P>0.05)。3.与对照组(Oμg/ml补骨脂素组)的MCF-7/ADR细胞相比,加药组的MCF-7/ADR细胞中p53基因上调2.15±0.23倍左右(P<0.05),凋亡抑制基因Bcl-2下调7.47±1.23倍(P<0.05),且凋亡执行基因caspase-3上调1.35±0.39倍(P<0.05),差异均具有统计学意义。为进一步验证试验的准确性,行琼脂糖凝胶试验,符合试验结果。结论:1.通过MTT实验,我们初步了解了 MCF-7/ADR细胞的耐药情况,MCF-7/ADR和MCF-7都对阿霉素具一定的耐药性,但MCF-7/ADR的效果更强一些。进一步实验发现,补骨脂素可抑制细胞的增殖活动,且具有剂量依赖关系。随剂量的增加,对耐药细胞株的逆转作用更强。由此我们可以初步推断,MCF-7/ADR确实具有耐药性,而补骨脂素可逆转其耐药性。2.通过流式细胞术,我们发现补骨脂素在不同浓度下,确实可阻滞细胞周期于G0/G1期,减少S期的所占比,且随补骨脂素浓度增加变化更加的明显。相对于不加药组,差异较明显(FG0/G1=1272.3.25,FS=134.27,p<0.05)。故我们推测补骨脂素确实可以阻滞细胞周期,且有剂量依赖关系。3.通过流式细胞术对凋亡的检测,我们发现补骨脂素可诱导细胞凋亡的发生,且浓度不同,凋亡比例也各不相同。各浓度组与对照组相比差异显著(p<0.05),但各浓度组间无明显差别(p>0.05)。故我们推测补骨脂素可诱导细胞凋亡,但无浓度依赖关系。4.通过PT-PCR实验和琼脂糖凝胶实验,我们发现无毒浓度的补骨脂素确实对乳腺癌耐药细胞的凋亡和周期相关基因产生了影响,如调高p53和caspase-3的表达,抑制抗凋亡基因bcl-2的表达。