不同微藻对缢蛏稚贝脂质组成和挥发性风味的影响研究及微藻挥发性物质产生的分子生物学研究

来源 :宁波大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuyaping0316
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缢蛏摄食海洋中的微藻,不同的微藻饵料所含脂类物质与挥发性化合物可能对缢蛏脂质和风味产生影响。本研究利用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术,对人工养殖中常用饵料微藻(角毛藻、球等鞭金藻、威氏海链藻、假微型海链藻)投喂的缢蛏稚贝后进行脂肪酸、甾醇分析,结果显示:实验共检测到16种脂肪酸和7种甾醇,不同的单种饵料及混合饵料的缢蛏投喂组的脂肪酸、甾醇差异很大。C16:2在含有威氏海链藻的单种饵料和混合饵料的投喂组被检测到;金藻混合藻饵料的缢蛏投喂组脂肪酸种类最丰富(13-15种),多不饱和脂肪酸(PUFA)百分含量最高,胆甾醇含量不高但富含菜子甾醇。从饵料微藻对缢蛏脂质营养组成的角度而言,金藻的混合饵料是缢蛏稚贝的最佳饵料。本研究还利用固相微萃取-气相色谱-质谱联(SPME-GC-MS)用技术,对投喂了不同饵料微藻(假微型海链藻、威氏海链藻、角毛藻、球等鞭金藻、青岛大扁藻、云微藻)的缢蛏稚贝进行肉质风味分析,研究不同微藻饵料对缢蛏稚贝肉质风味影响。研究发现:不同饵料投喂组的缢蛏稚贝在挥发性化合物的种类和数量上存在差异,实验共检测到71种化合物,其中醛、酮、烷烃种类最多(共43种),占总化合物种类60.56%,其中,醛类种类占总化合物种类的22.55%、酮类占21.12%、烷烃类占16.90%;此外,还有醇类、醚酯类化合物等,但其种类和百分含量均不高。3-甲基-正丁醛以61.37%-77.28%的高百分含量存在于假微型海链藻、威氏海链藻和角毛藻这三种硅藻饵料投喂组中,我们认为3-甲基-正丁醛是影响硅藻投喂缢蛏稚贝风味的主要物质;本研究还将缢蛏进行高温烹煮后进行风味物质的比较,结果显示:烹煮后的挥发性化合物共检测到49种,仍以醛、酮、烷烃种类最多(共32种),占总化合物种类的65.31%。醇类化合物种类数量呈现出下降趋势,烹煮后不饱和醇类如3-戊烯醇、3-羟基-1-辛烯醇等均无法检测到;酮类化合物种类也呈现下降趋势,烹煮后烯酮类如1-戊烯-3-酮、3-辛烯酮等化合物均无法检测到,二酮类化合物种类呈上升趋势,如戊二酮、己二酮、辛二酮等。醛类化合物的总百分含量相对于烹煮前呈下降趋势,但仍是百分含量第一的化合物;在烹煮后多不饱和烯烃(6-丁烯基-1,4-环庚二烯、3-辛炔等)也无法检测到;酯类化合物在烹煮后百分含量较烹煮前明显上升。我们可以认为,烹煮前后缢蛏风味差异是由于醛类化合物百分含量的降低和酯类化合物百分含量的升高造成的。此外,微藻的醇、醛、酮类等挥发性化合物常常通过脂氧合酶对脂肪酸进行分解产生,本研究在 NCBI查找假微型海链藻基因组,发现与脂肪氧化相关序列命名为脂肪酸羟化酶(FAH,fatty acid hydroxylase),通过将FAH进行体外全长克隆,并连接转化形成重组子FAH-pET-28a,转化大肠杆菌表达菌株BL21set,用0.5mM的IPTG进行原核表达诱导,并通过 SDS-PAGE和 Western Blot进行表达蛋白检测。结果显示,FAH全长1602bp,为一个完整的编码匡,蛋白编码533个氨基酸,分子量约为56.7KDa,能成功在体外进行表达,表达蛋白主要以包涵体形式存在,不易分离纯化获得活性蛋白。
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