麻城早熟油茶种质的SRAP分析及无性系的离体培养研究

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油茶(Camelliaoleifera)是我国重要的木本食用油料物种,属于山茶科(Theoideae)山茶属(Camellia)植物。本文利用SRAP分子标记技术研究了麻城早熟油茶种质资源的遗传多样性,并对其中两个无性系的离体培养进行了初步研究。主要研究结果如下:  (1)种质的遗传多样性  优化后SRAP-PCR反应体系为:10μL2×UtaqPCRMasterMix、1μL50ng/μL模板DNA、1μL10μmol/L上游引物、1μL10μmol/L下游引物、ddH2O补足20μL。  从42对引物组合中,筛选出12对多态性好、稳定性高的引物组合。3个居群的48个油茶种质共扩增出189条带,其中多态性带188条,多态性条带百分率99.47%。各引物对扩增的条带数为11~21条,平均每对引物扩增出15.75条带。  麻城早熟油茶总体水平的遗传多样性较高,其Nei’s基因多样性(He)为0.2508,Shannon’s信息指数(I)为0.4019,观测等位基因数(Na)为1.9947,有效等位基因数(Ne)为1.3830,群体多态性位点百分率达到了99.47%。油榨街、双庙关、风簸山3个居群中,油榨街居群的多态性位点百分率、Nei’s基因多样性及Shannon’s信息指数3个指标均最高,遗传多样性最丰富。  3个居群间的遗传距离为0.0372~0.0489,遗传一致度为0.9523~0.9634。48份油茶单株两两间的遗传一致度介于0.63~0.88之间。根据遗传一致度绘制了聚类图,在遗传一致度为0.66时,可将48株油茶分为5个组。  (2)早熟2号离体培养  适合带腋芽茎段春季消毒的方法为0.1%HgCl2消毒7min,培养20d,污染率为0;夏季为0.2%HgCl2消毒6min,培养20d,污染率为10%。初代培养的最适培养基配方为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L,培养45d,萌发率为36.66%;继代增殖培养的最适培养基配方为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L,培养40d,有效芽增殖倍数3.33,芽平均伸长量3.92cm。  (3)早熟4号离体培养  适合带腋芽茎段春、夏两季消毒的方法为0.2%HgCl2消毒6min,培养20d,污染率分别为6.66%和0。初代培养和继代增殖培养的最适培养基配方均为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L,培养45d,萌发率为60%,培养40d,有效芽增殖倍数2.33,芽平均伸长量2.00cm。花药愈伤组织诱导的最适培养基配方为1/2MS+TDZ1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L,培养20d,愈伤组织诱导率为83.33%。
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