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抗生素,被广泛用于治疗细菌感染,现今已经产生了很多严重的副作用,如导致了多重耐药菌的的出现,更严重的是,抗生素抑杀细菌使细菌死亡的同时释放出大量内毒素(LPS),释放的内毒素可引起多种慢性呼吸道疾病,也可产生内毒素休克,严重时导致死亡。内毒素(LPS,也称为脂多糖)是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分,是机体的重要致炎因子,微量的内毒素即可引发机体的一系列炎症反应,导致败血性休克,严重时甚至导致死亡,内毒素所引发的败血症已成为世界关注的医学难题。因此,寻求新兴的能够阻断LPS对机体免疫系统刺激的治剂已经成为医学界必要而迫切的任务了。抗菌肽(Antibacterial peptides,AMPs)作为机体免疫防御的重要组成部分,通过直接与细胞膜作用造成膜损伤以及通过选择性调节宿主免疫系统来清除病原微生物,因而病原微生物很难产生耐药性。近年来研究表明抗菌肽在杀灭细菌的同时能中和内毒素,抑制单核巨噬细胞活化,降低促炎细胞因子生成,表现出很好的抑制炎症和败血症作用,抗菌肽的这一显著特性使其成为新一代抗感染制剂的新星。AWRK6(SWVGKHGKKFGLKKHKKH)作为一种新型的阳离子抗菌肽,由抗菌肽dybowskin-2CDYa(SAVGRHGRRFGLRKHRKH)改造而成。实验室前期的研究结果表明,AWRK6拥有很强的抗菌活性,且HNN法预测可知,AWRK6的二级结构主要为α-螺旋,这种结构特征预示着其可能具有良好的中和LPS活性,因而本文中将对AWRK6中和内毒素的活性以及治疗败血症的疗效进行详细的研究。本文通过酶联免疫吸附法检测AWRK6在体外对LPS的中和活性,分析其对LPS所诱导的TNF-α和IL-8释放的影响,同时构建内毒素血症动物模型,检测AWRK6对内毒素血症小鼠的存活率的影响以及对内毒素所致的小鼠急性脏器损伤的保护作用,并进一步利用酶联免疫吸附法对内毒素血症小鼠血清中LPS、TNF-α和IL-8含量进行检测,从而对AWRK6抗内毒素活性进行全面的分析。最后,利用CCK-8实验分析AWRK6对小鼠肝细胞、脾淋巴细胞、腹腔巨噬细胞正常细胞的细胞毒性,以及高剂量的AWRK6的机体急性中毒反应,从而对AWRK6的使用安全性进行初步的评估。研究结果表明,抗菌肽AWRK6在体外能显著中和内毒素活性,并且中和LPS活性与AWRK6的浓度呈现出正相关。此外,AWRK6能显著抑制LPS所诱导的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、小鼠中性类细胞IL-8的释放,并且这种抑制作用显示出很好的剂量依赖关系。内毒素血症动物模型相关实验表明,经AWRK6治疗后,败血症小鼠的脏器损伤程度得到很好的改善,急性毒性症状得到有效的缓解,甚至治疗96 h后肝脏、肺基本恢复生理状态,表现出很好的治疗效果。更为重要的是,AWRK6能显著提高败血症小鼠的生存比率,从治疗前的100%死亡到治疗后的90%存活,这一治疗效果具有重要生物学意义。并能显著降低小鼠血液中TNF-α、IL-8的含量,且AWRK6中和LPS的量与TNF-α、IL-8的含量成负相关。毒性测定实验结果显示,AWRK6处理组小鼠肝细胞、脾淋巴细胞、腹腔巨噬细胞的存活率高达90%以上,与对照组相比无显著性差异。动物体内实验也表明,高剂量的AWRK6(50 mg/kg)对小鼠存活率没有明显影响,未表现出明显的急性毒性作用。这些研究结果也表明,具有良好的杀灭临床致病菌(如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等)的抗菌肽AWRK6,很有望成为抗生素的替代品,用于治疗由LPS所引起的败血性休克。