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本文建立了用HPIC同时测定山茱萸药材中马钱苷、齐墩果酸和熊果酸含量的方法,以及山茱萸中多糖、总苷的含量测定方法,通过单因素考察试验确定了各测定方法的样品溶液制备方法,并对所用含量测定方法进行方法学考察,最后测定了购自13个省市的16份市售山茱萸药材的这五种成分的含量。此外还测定了5个市售药材中游离氨基酸,水解氨基酸和重金属铅、镉、砷、汞的含量。
(1)市售山茱萸药材中马钱苷、齐墩果酸和熊果酸含量的同时测定。运用反相高效液相色谱—蒸发光散射检测法(RP—HPIC—ELSD)同时测定山茱萸药材中马钱苷、齐墩果酸和熊果酸的含量,通过单因素考察试验确定样品溶液制备方法为甲醇作溶剂,料液比1:30,60℃超声45 min。样品溶液用HPLC分析,用含等量醋酸(0.05%)的甲醇—水梯度洗脱。对该含量测定方法进行方法学考察,结果表明,用该法测定马钱苷、齐墩果酸和熊果酸含量分别在0.1511-2.0140μg、0.2052-1.3338μg、0.2028-1.3182μg范围内线性关系良好,加样回收率分别为98.6%,95.97%,96.29%,重复性好。市售山茱萸药材马钱苷的含量为0.57%-1.46%,齐墩果酸的含量为0.11%-0.17%,熊果酸的含量为0.33%-0.44%。该方法简便快速、准确、重现性好,可作为山茱萸药材质量控制的常规含量测定方法。
(2)市售山茱萸药材多糖含量测定。运用苯酚—浓硫酸法测定山茱萸中多糖含量。通过单因素考察试验确定样品溶液制备方法为水作溶剂,料液比1:30,90℃加热回流提取8h。对该含量测定方法进行方法学考察,结果显示,多糖测定在10-100μg范围内线性关系良好,加样回收率为98.87%,重复性好。市售山茱萸药材多糖的含量为2.4%-5.1%。山茱萸药材中的多糖含量差异较大,且山茱萸中的多糖具有多种药理作用,故建议将多糖的含量作为山茱萸药材的质量评价指标。
(3)市售山茱萸药材总苷含量测定。运用苯酚—浓硫酸法和香兰素—高氯酸法分别显色马钱苷和葡萄糖来制作四条标准曲线,对样品溶液也分别用两种方法显色,在同一波长下测定吸光度值,最后通过解方程组算出总苷的含量。通过单因素考察试验确定样品溶液制备方法为30%乙醇作溶剂,料液比1∶30,超声70min。对该含量测定方法进行方法学考察,结果显示,用苯酚—浓硫酸法显色,总苷和多糖分别在50─330μg、100-700μg范围内线性关系良好,用香兰素—高氯酸法显色,总苷和多糖分别在20-140μg、600-2000μg范围内线性关系良好。加样回收率为101.83%,重复性好。市售山茱萸药材总苷含量在1.6%-4.5%之间,山茱萸中总苷的含量差异较大,且其总苷也具有多种药理作用,故建议也将总苷的含量作为山茱萸药材的质量评价指标。
(4)市售山茱萸药材游离及水解氨基酸含量测定。本实验通过HPLC法测定了购自广州、河南、四川、山西、浙江五地药店的五份市售山茱萸药材的游离及水解氨基酸含量,从山茱萸中共检出17种水解氨基酸和13种游离氨基酸,从氨基酸的总量来看,水解氨基酸含量相差不大,为1.69%-2.34%之间。而游离氨基酸含量各地区相差较大,最高为0.21‰,最低为购自山西的药材,含量为0.035‰。含量均很低。水解氨基酸中包括了除色氨酸以外的全部必需氨基酸,说明山茱萸具有非常高的营养价值。
(5)市售山茱萸药材铅、镉、砷、汞含量测定。本实验通过原子吸收分光光度法测定了广州,河南,四川,山西,浙江五地市售山茱萸药材的重金属铅、镉、砷、汞的含量,种含量为0.0953‰-0.1966‰,铅含量为0.064‰-0.076‰,镉含量为0.1464‰-0.3097‰,汞未检出。山茱萸药材受镉污染最为严重,相比之下,来自四川和浙江的药材污染最小。而来自广州和河南的药材污染最为严重。