论文部分内容阅读
[目的]:本试验旨在探索出一条由豆类丝核菌培养液中提取苦马豆素的有效方法，从而为苦马豆素分离纯化开拓新的途径。
[方法]:豆类丝核菌定期用马铃薯琼脂培养基(PDA)移接，使其保持良好的生长力。其培养液是用改良的Czapeks培养基培养特定的豆类丝核菌菌株所得。整个试验过程中使用薄层层析法(TLC)进行实时检测。最终结果使用气相色谱法进行检测。
不同的方法分离纯化豆类丝核菌培养液中的苦马豆素：所用五种方法总体上使用氯仿、正丁醇萃取；无水乙醇索氏抽提、洗脱剂溶解：氨性氯仿溶解；硅胶柱层析分离等方法得到粗品，粗品经过减压升华得到最终样品。具体方法如下：
方法一：将处理好并密封保存的豆类丝核菌的培养液(pH<4)过滤，滤液用氨水调节pH>9，待沉淀完全后过滤。滤液蒸成浸膏状用无水乙醇索氏抽提8～12h，抽提液回收乙醇后，水溶液调碱用正丁醇萃取，其有机相用稀酸水(10％HCl)反萃，保留水相。水相调pH>9后蒸干，得到淡黄色晶体。将其放入小柱子或衬有滤纸的漏斗中，用无水乙醇洗脱，洗脱液蒸干后得到的淡黄色晶体经过减压升华后得到白色粉末状物质。
方法二：将处理好并密封保存的豆类丝核菌的培养液(pH<4)过滤，滤液用氨水调节pH>9，待沉淀完全后过滤。滤液用正丁醇萃取，其有机相用稀酸水(10％HCl)反萃，保留水相。水相调pH>9蒸干后用无水乙醇浸泡24h，浸泡液蒸干后减压升华，得到白色粉末状物质。
方法三：将处理好并密封保存的豆类丝核菌的培养液(pH<4)过滤，滤液依次用氯仿和正丁醇萃取，保留水相。水相用NaOH调pH>9蒸干，蒸干后所得浸膏用无水乙醇索氏抽提8～12h，抽体液蒸干后上硅胶柱，用洗脱剂(氯仿：甲醇：氨水：水=70:26:2:2)洗脱，每5ml一管。TLC实时检测，合并相同组分。蒸干后减压升华。
方法四：将方法一升华后所剩物质溶于水并重新用NaOH调pH>9，蒸干后再用氨性氯仿溶解，溶液蒸干后减压升华，得到黄色膏体状物质。
方法五：将处理好并密封保存的豆类丝核菌的培养液(pH<4)过滤，滤液依次用氯仿和正丁醇萃取，保留水相。水相用NaOH调pH>9蒸干，蒸干后所得浸膏用无水乙醇索氏抽提8～12h，抽体液蒸干后用氨性氯仿溶解，溶液蒸干后减压升华。
[结果]:其中方法一和三的结果较好，所得样品经过TLC和气相色谱检测，含有一定量的苦马豆素。
[结论]:经检测，得到的样品中含有少量的苦马豆素。虽然含量极少，但是至少说明对试验的方向把握是正确的。试验方法还需要进一步的研究和改进。