Il-17F对大鼠成骨细胞BMp-2及Noggin mRNA表达的影响

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目的:骨细胞和免疫细胞共同起源于骨髓细胞,它们在功能上也有一定的相连,并且受一些相同细胞因子的影响。最近有研究显示IL-17因子家族中的一个重要成员IL-17F在体内具有促进成骨细胞的作用,但是相关研究甚少。本研究通过提取并培养大鼠原代成骨细胞,以不同浓度的IL-17F刺激成骨细胞,观察IL-17F对成骨细胞的增殖能力、骨形态发生蛋白2(Bone Morphogenetic Protein2,BMP-2)及BMP-2抑制因子Noggin mRNA表达的影响。  方法:  1.大鼠原代成骨细胞的提取、培养及鉴定  新生24h内的Wistar大鼠8只,脱颈处死后,于无菌操作下取出颅骨,完全去除骨膜、血管及结缔组织,反复冲洗骨片至透亮,将骨片剪碎后,运用胰酶-胶原酶消化法及组织块法提取原代成骨细胞。  将提取的原代成骨细胞加适量培养液于培养箱内进行培养,并在传代时运用差速贴壁法对成骨细胞进行纯化,取纯化后的第4代成骨细胞进行实验。  采用形态学观察及碱性磷酸酶(ALP)染色法对成骨细胞进行鉴定。  2.实验分组及IL-17F刺激  将纯化后的第4代大鼠成骨细胞随机分为正常对照组和实验组。对照组使用正常培养液进行培养;实验组分别用正常培养液配制的含有不同浓度(1ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)IL-17F的培养液进行培养,共5个实验组,分别于干预第1、3、5天后进行指标检测。  3.指标检测  (1)采用MTT法检测成骨细胞增殖活性。  (2)采用RT-PCR检测成骨细胞BMP-2及Noggin mRNA的表达。  结果:  1.大鼠原代成骨细胞培养与鉴定:  培养的原代成骨细胞贴壁生长稳定,细胞形态和生长状况均符合成骨细胞的特征。ALP染色结果显示,大量阳性细胞胞核及胞质内可见ALP染色成的灰黑色颗粒或块状深染沉淀,鉴定为成骨细胞。  2.IL-17F对成骨细胞增殖的影响  MTT结果显示,与对照组相比,第1天时只有100ng/ml实验组细胞增殖率明显升高(P<0.05),10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml实验组虽然也有升高但无统计学意义(P>0.05);第3天与第5天时,10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml实验组细胞增殖率均显著升高(P<0.05);1ng/ml实验组细胞增殖率在三个时间点变化均不明显(P>0.05)。  3.IL-17F对成骨细胞BMP-2及Noggin mRNA表达的影响  RT-PCR结果显示,与对照组相比,20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml实验组BMP-2 mRNA表达水平从第1天开始就明显升高(P<0.05),而10ng/ml实验组BMP-2 mRNA表达水平第3天开始才显著升高(P<0.05),1ng/ml实验组BMP-2 mRNA表达水平则在三个时间点均无明显变化(P>0.05)。与对照组相比,10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml实验组Noggin mRNA表达水平均从第1天开始就显著降低(P<0.05),1ng/ml实验组Noggin mRNA表达水平则始终无明显变化(P>0.05)。  结论:  一定浓度的IL-17F可以促进体外培养的大鼠成骨细胞增殖,提高大鼠成骨细胞BMP-2 mRNA表达,降低Noggin mRNA表达,并且呈一定的剂量-时间依赖性。
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