在过去的几十年时间中,全世界对衰老的研究取得了空前发展,尤其是通过生物化学过程和遗传学途径的日益进步,在一定程度上控制住了衰老及衰老相关疾病。目前许多研究人员认为,衰老是由干细胞衰退、DNA退化、饮食精神因素、衰老基因活跃等一些综合因素共同产生所导致的结果,现如今仍未形成统一的衰老理论。研究衰老及衰老相关疾病,最终的目的是能够寻找药物作用靶标从而实现改善人类健康的愿望。酿酒酵母作为单细胞真核生物,由于其易于培养、便于操作、繁殖速度快的特点,往往用来作为遗传工程和细胞周期研究的模式生物。Rif1和Rif2是两个负调节端粒长度的调节因子。一些证据表明,Rif1和Rif2抑制端粒酶进入端粒,使得端粒长度减短。目前许多学者认为,端粒长度已经成为细胞衰老的一项标志。在本课题研究中,我们通过染色法和克隆计数法发现,Rif1和Rif2同时缺失使得芽殖酵母寿命显著增加,且突变体对外界压力的抗性同样增强。但是在之后的实验中发现,Rif1和Rif2并非通过改变端粒长度来调控酵母寿命,于是我们通过生物信息学技术分析了Rif1和Rif2的理化性质、细胞定位、结构分析、相互作用蛋白预测等,为进一步深入研究Rif1与Rif2的调控机制提供思路。核孔蛋白是组成调节蛋白和核酸进出核的核孔复合体的蛋白质的总称。在早期的实验中,我们做了雷帕霉素敏感性生长实验,发现Nup84或Nup170突变体对低浓度的雷帕霉素处理敏感,提示Nup84和Nup170直接参与了雷帕霉素介导酿酒酵母寿命的调控。本次研究中,我们对两种突变体进行了一系列的寿命及寿命相关表型的检测,实验结果表明,两种突变体相比于野生型酵母在经过雷帕霉素处理后,寿命显著减短,并且对外部环境的压力抗性减少。在实验中,我们发现Nup84突变体和Nup170突变体中Atg8表达量发生改变,而Atg8是细胞自噬的调控因子,我们猜测Nup84和Nup170参与雷帕霉素介导酵母细胞的自噬。通过ALP法检测碱性磷酸酶活性,我们发现Atg8、Nup84或Nup170的缺失导致细胞内碱性磷酸酶活性减少,表明Nup84和Nup170参与了雷帕霉素介导的细胞自噬。Rim15正调控Atg8转录,我们通过IP实验和Western Blot检测,猜测Nup84和Nup170通过与Rim15相互作用,参与雷帕霉素调控酵母细胞自噬的过程。本研究也为雷帕霉素介导的寿命调控机制提供了新思路。