背景:HER-2蛋白是具有酪氨酸激酶活性的1类跨膜受体之一,在许多信号通路的致癌激活中起到了重要作用,比如相关的磷酸肌醇3-激酶(PI3K)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等信号通路。乳腺癌中大约15-20%具有HER-2基因的扩增、蛋白或者mRNA的过表达。曲妥珠单抗是治疗HER-2阳性乳腺癌的有效药物,可直接靶向HER-2酪氨酸激酶受体。但是,对曲妥珠单抗的原发性或继发性耐药已成为影响疗效的关键因素,其相关的耐药机制较为复杂。HER-2基因的突变现象在既往研究过程中被发现,研究者认为HER-2突变会对HER-2阳性乳腺癌进行曲妥珠单抗的治疗产生影响,HER-2基因的突变可能是导致其耐药的一个重要原因。而且,既往的研究证明PI3K/Akt信号通路的激活是导致曲妥珠单抗耐药的重要机制,评估PI3K通路的激活状态可能会成为预测HER-2阳性乳腺癌对曲妥珠单抗反应性的方法。方法:在本研究中,首先,我们利用HER-2野生型和HER-2突变体(HER-2Q429R,HER-2 Q429H和HER-2 T798M是最常见的3种类型的突变)构建了 MCF7细胞系,明确在HER-2野生型和HER-2突变型细胞中,HER-2蛋白的表达情况。其次,我们使用曲妥珠单抗进一步处理细胞,通过细胞计数试剂盒-8(CCK8)和BrdU评估细胞增殖抑制活性,Annexin V-FITC细胞凋亡实验检测评估曲妥珠单抗对HER-2突变型MCF7细胞的凋亡的影响,Transwell侵袭实验测定细胞侵袭性变化。另外,我们进行荧光染色和共免疫沉淀以检测细胞内HER-2蛋白质水平和HER-2与曲妥珠单抗之间的相互作用。最后,我们利用PI3K抑制剂(LY294002)和曲妥珠单抗联用验证HER-2突变与P13K/Akt通路的相关性。结果:结果显示我们构建的HER-2突变型和HER-2野生型MCF7细胞HER-2高表达,且HER-2表达水平无明显差异,但HER-2突变型细胞的曲妥珠单抗药物敏感性低于HER-2野生型细胞。HER-2蛋白与曲妥珠单抗的相互作用并未受到HER-2基因突变影响,但HER-2突变型细胞的PTEN和P27KIP1的表达降低,PI3K、p-Akt和mTOR的表达增加。此外,加用抑制PI3K/Akt信号通路的药物能够增加HER-2突变型MCF7细胞对曲妥珠单抗药物的敏感性。结论:PI3K/Akt信号通路的失调是导致HER-2突变乳腺癌细胞对曲妥珠单抗耐药的主要机制之一。我们的研究将为进一步改善曲妥珠单抗靶向乳腺癌治疗效果提供理论依据。背景:乳腺癌是目前全球最高发的女性恶性肿瘤,是威胁女性健康最主要的因素之一。在乳腺癌治疗过程中,前哨淋巴结活检术是目前评估病人腋窝状态的主要方式之一。在前哨淋巴结阳性行腋窝淋巴结清扫的乳腺癌病人中,有大约40%的病人存在非前哨腋窝淋巴结的转移,而大约60%的病人不存在非前哨淋巴结的转移。也就是说,大约60%的病人进行了可能没有意义的腋窝淋巴结清扫。ACSOG Z0011和IBCSG 23-01研究相继发布了 10年随访的研究结果,进一步证实前哨淋巴结孤立肿瘤细胞转移和微转移的病人,进行腋窝淋巴结清扫组和不进行腋窝淋巴结清扫组的无病生存和总生存没有统计学差异。然而前哨淋巴结宏转移的病人是否需要进行腋窝淋巴结清扫的研究较少,之前的研究因为纳入了太多微转移和孤立肿瘤细胞转移的病人,其结果存在一定的偏倚。本研究分析前哨淋巴结宏转移的乳腺癌病人非前哨淋巴结转移的影响因素,建立预测非前哨淋巴结转移的预测模型,并分析其对临床治疗的启示意义。方法:本研究第一组数据纳入了 2012年1月到2016年12月在中国医学科学院肿瘤医院乳腺外科治疗的719例前哨淋巴结宏转移且行腋窝淋巴结清扫的乳腺癌病人,利用卡方检验和多因素回归分析分析影响非前哨淋巴结转移的影响因素,利用R语言创建预测模型,进行交叉验证并得到AUC值,第二组数据以同样入组条件纳入2017年1月至6月在我院治疗的94位病人进行外部验证,得到AUC值。结果:我们通过分析第一组数据,发现肿瘤T分期、脉管瘤栓、切除前哨淋巴结数目、阳性前哨淋巴结数目、超声评估腋窝淋巴结状态和手术方式是影响非前哨淋巴结转移的独立影响因素,同时此6个影响因素也是创建预测模型最重要的因素,并利用交叉验证得到AUC值为0.72(95%CI:0.68-0.76),利用第二组数据进行外部验证得到 AUC 值同样为 0.72(95%CI:0.61-0.83)。结论:肿瘤T分期、脉管瘤栓、切除SLNs数目、阳性SLNs数目、超声评估ALNs和手术方式是NSLNs转移的影响因素,在乳腺癌病人的治疗中,针对不同的乳腺癌病人,我们应该有针对性的治疗方案,在NSLNs转移风险高且病人拒绝行ALND时,医生应该增加其他的替代治疗方案,如放疗等。