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生物细胞基因组不断受到各种外源性或内源性的损伤刺激,一旦损伤没有及时修复或者错误修复,则易导致损伤的累积乃至突变进而导致染色体畸变(chromosomeaberration,CA)。染色体畸变包括染色体结构畸变和染色体数目畸变两方面。在诸多导致染色体畸变的发生因素中,双链损伤(double-strand breaks, DSB)作为所有损伤类型中对细胞伤害最严重的一种,可直接导致染色体缺失,同时其修复异常极易导致染色体出现大面积易位、倒位等。另一方面,中心体异常尤其中心体数目扩增导致的分裂极异常则可通过细胞分裂异常导致异倍体及染色体断裂等畸变。作为最严重的基因组失稳,染色体畸变是肿瘤的特征之一,在肿瘤发生、发展中可能发挥早期始动作用。因此,深入解析基因组稳定性的维护以及染色体畸变的发生机制,有助于进一步发现肿瘤治疗或预防新策略。我们前期工作中发现伴随杂合性缺失(Loss of heterogeneity,LOH)等染色体畸变,膀胱癌DNA修复能力减弱,膀胱癌组织中重要DNA损伤应答蛋白XPC(Xeroderma Pigmentosum group C)低表达,提示XPC低表达可能是导致膀胱癌中染色体畸变的始动因素之一。作为早期DNA损伤识别蛋白,除在核苷酸切除修复途径(Nucleotide excision repair,NER)中发挥重要的经典作用外,近年来研究显示,XPC在其它DNA修复途径、细胞凋亡以及染色体重塑等生物过程中发挥新的角色。我们前期线索也提示XPC可能在双链损伤修复及周期调控中有一定的作用,但机制未知,同时,细胞周期与中心体扩增密切相关,因此我们推测XPC可能通过影响双链损伤及中心体扩增影响染色体畸变的发生过程。基于上述科学假说,我们分别采用正常细胞HEK293及膀胱肿瘤细胞T24,首先利用shRNA技术,慢病毒感染细胞建立XPC稳定低表达HEK293及T24细胞模型;采用不同类型的DNA损伤(顺铂、博来霉素、依托泊苷),探究XPC表达缺失对双链损伤修复、中心体扩增的影响以及相关分子机制。我们研究结果显示:1.通过G显带染色体核型分析方法、微核实验证实XPC表达缺失导致多种DNA损伤剂处理后染色体畸变2.免疫荧光技术证实XPC缺失导致DNA损伤后中心体数目扩增比例明显上升3.利用免疫荧光技术,首次发现XPC表达缺失降低p-ATM, Rad51等关键双链损伤应答蛋白在DNA损伤处募集;4.Western blot实验结果发现干扰XPC后,双链损伤应答及修复蛋白(ATM,ATR,p-ATM, p-BRCA1, BRCA2, RAD51, centrin2, p-p53, DNA-PKcs)的表达明显下调或者活化时间明显缩短5.采用流式细胞技术检测细胞周期,结果显示XPC缺失导致顺铂损伤后,S期及G2/M期阻滞延长;同时,Western blot实验结果发现:周期相关蛋白CDK1表达上调,CDK2激酶活性上调,且损伤应答通路关键分子p-ATM及下游p-p53异常活化结论:XPC表达缺失可能参与到包括膀胱癌在内的染色体畸变的发生过程中。XPC缺失通过影响重要双链损伤应答蛋白(ATM, ATR, p-ATM, p-BRCA1, BRCA2, RAD51,centrin2, p-p53,,DNA-PKcs)之间的相互作用从而在双链损伤修复通路中发挥重要的信号转导作用,进而通过降低双链损伤的修复效果影响染色体结构稳定性;另一方面,XPC表达缺失上调周期蛋白的表达或激酶活性(CDK1, CDK2)或异常活化损伤应答通路关键分子(p-ATM, p-p53)导致中心体扩增从而影响染色体数目稳定性。