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背景与目的：随着年龄的增加，机体各组织器官功能出现退行性改变，导致各种老年性疾病的发生。衰老已被认为是心血管疾病发生的一个重要的危险因素。内皮是最容易受衰老影响的组织之一，内皮细胞衰老是内皮衰老的基础。研究内皮细胞衰老机制并探索减缓内皮细胞衰老的新方法，对心血管疾病的防治具有重要意义。自由基学说认为氧化应激损伤是导致细胞衰老的主要原因之一。本研究采用过氧化氢（hydrogen peroxide，H2O2）诱导建立人脐静脉内皮细胞（human umbilicalvascular endothelial cells，HUVECs）衰老模型，旨在探讨硫化氢（hydrogen sulfide，H2S）对HUVECs衰老的影响及其机制。方法与结果：1.采用酶消化法分离HUVECs，并进行原代培养，选取第二代稳定生长的细胞，倒置显微镜下观察，细胞呈短梭形，边界清晰，细胞经体外培养7天后，细胞融合呈现典型的铺路石样排列。采用免疫组织化学法检测HUVECs特异性标记物Ⅷ因子的表达以鉴定HUVECs及其纯度。2.采用25μmol/L H2O2诱导HUVECs建立细胞衰老模型，应用相差光镜观察细胞形态，流式细胞术检测细胞周期，衰老相关β-半乳糖苷酶（senescenceassociated acidic-β-galactosidase， SA-β-gal）染色检测衰老细胞率，蛋白免疫印迹（Western Blot）检测细胞周期调控因子p21的表达，从而鉴定HUVECs的衰老程度。结果表明，H2O2处理后，细胞体积增大，细胞边界不清，大小不均，呈衰老细胞样形态；SA-β-gal阳性细胞数达到11.2±1.06%（P<0.05）；G0/G1期细胞比例增加25%；细胞周期蛋白p21的表达也明显上调，为正常细胞的1.5倍，且差异具有统计学意义（P<0.05）。3.选择不同浓度NaHS（0、15、30、60μmol/L）预先处理HUVECs48h后，再用H2O2诱导HUVECs衰老，采用SA-β-gal染色，流式细胞术检测细胞周期变化，MTT法检测细胞增殖率，划痕实验检测细胞迁移率，分析H2S对H2O2诱导的HUVECs衰老的影响。结果显示，与H2O2单独处理组比较，NaHS组SA-β-gal染色阳性细胞数随浓度的增高而减少（P<0.05），且NaHS浓度为60μmol/L时阳性细胞数最少（P<0.01）；G0/G1期细胞比例降低16%，S期细胞比例增加14%（P<0.05）；HUVECs的增殖迁移功能增加。4.采用Western Blot及Sirt1活性检测试剂盒测定H2S抗H2O2诱导HUVECs衰老中Sirt1蛋白表达及其活性，分析H2S对Sirt1的调节机制，结果表明，与H2O2相比，NaHS组Sirt1蛋白的表达没有明显改变，Sirt1的活性上调了19.21%。5.采用沉默信息调节因子1（silent information regulator1， Sirt1）抑制剂NAM与NaHS共同孵育HUVECs48h，再应用H2O2诱导HUVECs衰老，观察HUVECs SA-β-gal染色阳性细胞数的改变以及HUVECs增殖、迁移能力的变化，分析Sirt1被抑制后， H2S抗H2O2诱导HUVECs衰老的作用是否发生变化。结果显示，与NaHS组相比较，NAM+NaHS组SA-β-gal染色阳性细胞数增加了50%，并且HUVECs增殖，迁移功能明显降低。结论：H2S可拮抗H2O2诱导的HUVECs的衰老，其作用机制与上调Sirt1的活性有关。