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随着人口的老龄化,阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)已成为人们日益关注的焦点。本实验旨在探讨预先给予大鼠灵芝孢子和红景天,能否缓解AD模型(小剂量侧脑室注射STZ)大鼠大脑海马氧化应激水平的增高、线粒体的损伤、神经元的凋亡,能否保护学习记忆能力不受损伤,为AD的预防提供一定的线索。本研究分为两部分:
第一章预先服用灵芝孢子低、中、高剂量对侧脑室注射链脲佐菌素大鼠模型海马神经元保护作用的研究
目的:探讨预先服用灵芝孢子低、中、高剂量对侧脑室注射STZ大鼠海马神经元保护作用的效果,以摸索出最佳剂量。
方法:应用SD成年雄鼠75只,随机分为空白对照组、未用药模型组和灵芝孢子低(2g·kg-1)、中(4g·kg-1)、高(8g·kg-1)剂量组,每组15只。其中灵芝孢子低、中、高剂量组大鼠分别给予2g/kg.d、4g/kg.d、8g/kg.d的剂量灌胃3周,其余两组仅给予0.5%羧甲基纤维素钠(灵芝孢子的溶剂)同等剂量灌胃3周。停止灌胃后第1天和第3天,经戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,固定于立体定位仪上,在前囟后0.8mm、矢状缝侧左右2.2mm处分别钻孔,微量注射器垂直进针4.5mm。将STZ溶解于人工脑脊液中,未用药模型组和灵芝孢子组分别按照1.5mg/kg剂量注入双侧脑室,空白对照组则注入同等体积的人工脑脊液。术后14天,行水迷宫检测,历时5天;术后21天,冰上取脑按照试剂盒说明检测海马组织GSH、GR、MDA、细胞色素氧化酶定量,用HPLC法检测海马ATP含量;常规灌注固定取脑冰冻切片,行中性红染色,荧光免疫组化双标染色(Caspase—3与NeuN)。
结果:STZ组和灵芝孢子低剂量组大鼠海马GSH,GR,COX,ATP含量明显降低,MDA含量明显增高,中性红染色和荧光免疫组化双标染色观察并计数海马回神经元凋亡增加,水迷宫检测定位航行实验逃避潜伏期时间长而空间探索实验原平台象限停留时间长。与STZ组和灵芝孢子低剂量组相比,CSF组和灵芝孢子高剂量组大鼠海马抗氧化物质GSH、GR含量明显增高,氧化应激产物MDA含量明显降低;海马的ATP含量和细胞色素氧化酶含量明显增高;中性红染色计数,海马五个区神经元总数明显较多,神经元结构较完整;荧光免疫组化双标染色(Caspase—3与NeuN),海马CA3区双标细胞比率较少;水迷宫检测,大鼠定位航行时间短,而空间探索时在原平台象限停留时间长。灵芝孢子中剂量组各指标检测结果介于低剂量组和高剂量组之间。
结论:高剂量(8g·kg-1)预先给予灵芝孢子3周,大鼠海马应对STZ造成的氧化应激和能量障碍能力较强,海马神经元和学习记忆受损伤较小。
第二章预先联合服用芝孢子和红景天对侧脑室注射链脲佐菌素大鼠模型海马神经元保护作用的研究
目的:探索预先给予大鼠每天联合服用灵芝孢子8.0 g·kg-1和红景天3.0 g·kg-13周,是否可以保护海马不受或减轻小剂量STZ诱导的氧化应激和能量代谢障碍的损害;
方法:应用SD成年雄鼠15只,每天大鼠灌服1:1混合的灵芝孢子8.0 g·kg-1和红景天3.0 g·kg-13周,余同第一章。术后21天取材,行细胞色素氧化酶酶组织化学染色,透射电镜观察酶的活性。其余检测方法同上一章。
结果:与STZ组相比,联合组和灵芝孢子高剂量组大鼠海马抗氧化物质GSH、GR含量明显增高,氧化应激产物MDA含量明显降低;海马的ATP含量和细胞色素氧化酶含量有所增高,酶组化染色电镜观察的定性结果也证明,联合组、高剂量组可见神经元胞体内、线粒体内膜和嵴上高电子密度沉淀物较多,线粒体结构较为完整;中性红染色计数,海马五个区神经元总数明显较多,神经元结构较完整;荧光免疫组化双标染色(Caspase—3与NeuN),海马CA3区双标细胞比率较少;水迷宫检测,大鼠定位航行时间短,而空间探索时在原平台象限停留时间长。
结论:大鼠预先按照1:1联合服用灵芝孢子8.0 g·kg-1和红景天3.0 g·kg-1,可以增强海马应对STZ造成的氧化应激和能量代谢障碍的能力,保护海马神经元和学习记忆能力不受明显影响;联合用药的效果与单独用灵芝孢子每天8.0 g·kg-1剂量的效果相当。