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青枯菌是世界范围内最具有毁灭性的植物病原菌之一，由于青枯菌的致死性和持久性强，并且具有广泛的寄主范围以及广阔的地理分布，因此造成的经济损失巨大。对青枯菌致病性的解析，将为开辟控制青枯病危害的新途径奠定理论基础。随着GMI1000(1号小种)，UW551(3号小种)等11个菌株全基因组测序工作的完成，青枯菌致病机理的研究进入了功能基因组学时代。Ⅵ型分泌系统(type Ⅵ secretion system, T6SS)是新近发现的广泛存在于革兰氏阴性细菌中的一种分泌系统。具有T6SS的细菌，对于动物和人类的健康都有严重的威胁，目前T6SS的研究主要集中在动物和人类病原菌。经生物信息学分析发现，青枯菌中也存在T6SS基因簇，然而对于T6SS在青枯菌中的作用机理尚不明确，本论文在实验室前期工作的基础上，以青枯菌GMI1000菌株T6SS中的tssM基因和tssB基因为研究切入点，旨在更深一步地解析植物青枯菌中Ⅵ型分泌系统的作用机理。1. tssM基因的突变对青枯菌致病力及基础生物学的影响致病力测定结果表明，tssM基因缺失突变株的致病力较GMI1000野生型菌株显著下降，互补菌株可基本恢复突变菌株的致病力；基础生物学测定结果表明，tssM基因缺失突变株在根部及向上扩展能力、形成生物膜的能力及运动能力上较野生型都有明显的下降。qRT-PCR分析鞭毛相关基因，crp、fliA、flgM、flhD和flhC在tssM基因缺失突变株中均成下调表达。qRT-PCR分析III型分泌系统相关基因，popP1、popA、popB和popC在tssM基因缺失突变株中均成上调表达。2.构建了tssB基因缺失突变株及互补菌株经生物信息学分析，青枯菌GMI1000菌株的tssB基因长度为1491bp，共编码496个氨基酸，分子量约为55kDa。tssB基因编码的蛋白TssB含有一个未知功能的结构域DUF877。DUF877属于一个与Ⅵ型分泌系统座位(locus)有关的尚未被研究的细菌蛋白家族。TssB蛋白可能具有一个跨膜结构域，但不具有信号肽。采用同源重组双交换法构建了tssB基因的重组自杀质粒载体，并通过筛选获得了tssB基因的突变株及互补菌株。3. tssB基因的突变对青枯菌致病力及基础生物学的影响致病力测定结果表明，tssB基因缺失突变株的致病力较GMI1000野生型菌株显著下降，互补菌株可基本恢复突变菌株的致病力；基础生物学测定结果表明，tssB基因缺失突变株在根部及向上扩展能力、形成生物膜的能力及运动能力上较野生型都有明显的下降。qRT-PCR分析鞭毛相关基因，crp、fliA、flgM、flhD和flhC在tssB基因缺失突变株中均成下调表达。qRT-PCR分析III型分泌系统相关基因，popP1、popA、popB和popC在tssB基因缺失突变株中均成下调表达。4. TssB蛋白和TssC蛋白的互作研究分别构建了TssB蛋白和TssC蛋白的诱饵载体和捕获载体，酵母双杂交结果表明，TssB蛋白和TssC蛋白有较强的相互作用。对TssB蛋白的氨基酸序列进行分段，分别与TssC蛋白进行酵母双杂交试验，结果表明，TssB蛋白N端的63~112段氨基酸序列能够与TssC蛋白发生相互作用。5. Hcp蛋白的泌出及TssB蛋白的定位分析Hcp蛋白的泌出试验结果表明，野生型GMI1000菌株和互补菌株中均能够产生并泌出Hcp蛋白，突变菌株GMI1000ΔtssB中能够产生Hcp蛋白，但是无法正常泌出Hcp蛋白。TssB蛋白的亚细胞分离试验结果表明，野生型GMI1000菌株的菌体蛋白和膜蛋白均能够与TssB多克隆抗体结合，表现出与TssB大小一致的条带，而可溶部分不能与TssB多克隆抗体结合，表明TssB蛋白在细胞膜中存在。