论文部分内容阅读
本文主要从以下几个方面展开：
一、二十二碳六烯酸乙酯对大鼠脑皮层细胞生长、发育的营养作用
DHA，学名二十二碳六烯酸，属于n-3(或称ω-3)系列多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated Fatty Acids，PUFAs)，是哺乳动物体内最重要的n-3多不饱和脂肪酸(n-3 PUFA)之一，尤其在神经细胞中的分布广泛。并且伴随着DHA在中枢神经系统(CNS)中的转运，其在神经细胞突起的发生，突触的形成过程中具有重要的作用。在动物和人体模型中的研究发现，DHA对神经系统和视觉系统的形成及发育存在重要作用，在动物模型中，如果2-3代动物食用DHA缺乏的饲料的话，将会发生严重的学习记忆能力下降和行为异常。
目前大多对DHA的营养研究需要对整体动物的长期给药来体现DHA对中枢神经系统功能的影响。而体外细胞培养的条件下，能够使细胞更充分地接触和吸收DHA，并且能够更好地观察细胞形态以及组织化学的变化。
本研究发现对于离体培养的大鼠脑皮层细胞，25～50μM DHA乙酯显著提高了神经细胞存活率，而低剂量DHA乙酯(12.5μM)并无显著效果，高剂量DHA乙酯(100～200μM)反而显示出毒害作用，另外，25μM DHA乙酯预给药有效防止了不同培养天数(DIV)的神经细胞的死亡。DHA乙酯(25μM)贴壁后立即给药在培养的第24和48小时(HIV)显著提高了长有突起的细胞比率，单个细胞的突起分支数、最长突起长度、突起总长度、细胞长径、短径、周长、面积及体积。显著增加了细胞总蛋白和特异性蛋白GAP—43，以及磷脂酰丝氨酸(PS)和磷脂酰乙醇氨(PE)的含量，降低了磷脂酰胆碱(PC)的含量。表明适当剂量的DHA乙酯(25μM)对神经细胞的存活具有保护作用，对其生长具有营养作用，并且可能是通过促进相关蛋白和磷脂的合成而发挥其营养和保护作用的。
二、GSTP1对内毒素诱导的大鼠离体胸主动脉舒张抑制作用的研究
细菌感染引起的全身炎症反应综合综(SIRS)的主要症状之一就是低血压症(Hypotension)，其主要由血管舒张引起。而引起血管舒张主要是因为在人体被细菌感染以后，细菌细胞壁中的内毒素(endotoxin)促使血管平滑肌和动脉外膜纤维原细胞中的诱导型的一氧化氮合酶(induced nitric oxide synthase)的表达，从而释放了大量的一氧化氮，引起血管平滑肌舒张。
谷胱甘肽—S—转移酶(GST)属Ⅱ相代谢酶，是催化谷胱甘肽(GSH)与亲电子的外源物结合的二聚体酶，并可灭活外源物，促使它们排出体外，它们在人群中呈多态性分布。谷胱甘肽—S—转移酶是一组同工酶超家族，谷胱甘肽S—转移酶P1(GSTP1)是哺乳动物体内一种重要的解毒酶，参与维持机体内的氧化还原平衡。GSTP1属于机体内源性蛋白，不会引起免疫原反应，是一种具有临床应用价值的抗氧化剂，在抗肿瘤、抗炎抗氧化等领域具有很高的开发潜力，值得作深入研究。我们前期的研究显示，GSTP1在细胞水平具有明显的调节MAPK，JNK，TRAF2等信号通路的作用。
本文在体外诱导表达并纯化了GSTP1蛋白，利用离体器官浴槽和PowerLab多通道生理记录仪记录离体血管在LPS作用下舒张的情况以及GSTP1在抑制由LPS引起的血管舒张中的作用。并且利用免疫印记的方法研究了GSTP1在NO信号通路中的作用。