论文部分内容阅读
第一部分30例黏多糖贮积症Ⅱ型儿童IDS基因突变分析目的:黏多糖贮积症Ⅱ型（mucopolysaccharidosis typeⅡ,MPSⅡ,OMIM:309900）是一种罕见的X连锁隐性遗传病,该病是由于艾杜糖-2-硫酸酯酶（iduronate-2-sulfatase,IDS）活性缺陷,导致黏多糖在几乎所有的细胞、组织、器官中累积,使脏器功能受损。本文回顾性分析了30例MPSⅡ患儿的临床特征、白细胞IDS活性、IDS基因突变类型。方法:用荧光底物法测量患者白细胞的IDS活性。遗传学检测包括家系全外显子测序（whole-exome sequencing,WES）和拷贝数变异分析（copy number variation sequencing,CNV-seq）。结果:30例均为男性患者,临床表现主要包括:肝脾肿大,鼻梁低平,舌大,头大,关节僵硬,椭圆形椎骨,骨质疏松,智力落后,发育迟缓,阻塞性睡眠呼吸暂停,腺样体肥厚,脐疝,腹疝等。确诊的年龄为4个月～13岁。IDS活性:0.28±0.49nmol/g/min（参考值:6.1～20.8nmol/g/min）。在IDS基因中鉴定出25种不同的突变,包括16种文献已报道的致病性突变以及数据库中尚未查询到的9种新突变。在9种新突变中,6种移码突变,分别是c.815-818dup AACG、c.1453dup A、c.1270-1271del GT、c.1484-1485ins TA、c.854del A、c.12-13del CC,以及3种错义突变,分别是c.325T＞G、c.140T＞C、c.248T＞G。对3个新发现的错义突变进行了计算机蛋白结构模拟分析,结果表明突变位于IDS蛋白的硫酸酯酶结构域活性位点附近,W109G色氨酸被甘氨酸取代,L47P亮氨酸被脯氨酸取代,V83G缬氨酸被甘氨酸取代,预期改变了它们的静电相互作用,可能对蛋白结构产生影响,从而影响蛋白功能。结论:本文的研究扩展了MPSⅡ的基因谱,为MPSⅡ的分子机制提供了新的见解,并有助于未来基因型-表型相关性研究、评估预后及开发新的治疗方案。第二部分异基因造血干细胞移植治疗黏多糖贮积症Ⅱ型临床效果分析目的:为了研究同种异体造血干细胞移植对MPSⅡ型儿童的疗效。方法:对2019年1月至2021年3月期间接受同种异体造血干细胞移植（hematopoietic stem cell transplantation,HSCT）治疗的30例MPSⅡ型患儿进行回顾性分析,内容包括受者情况、供者情况、干细胞移植后粒细胞及血小板植入时间、酶学变化、移植后嵌合度、移植相关并发症及脏器恢复情况。结果:30例均为男性患儿,移植时的中位年龄为3岁7月（1岁4月～13岁1月）,平均随访时间为16个月（4～30个月）。5例患儿接受双份无关脐带血干细胞移植,22例接受单份无关脐带血干细胞移植,3例接受父亲外周血干细胞移植。30例患儿在移植后1个月均实现了完全供体嵌合、酶水平达到正常值。12例患者在移植后合并不同程度移植相关并发症,发生率为40%（12/30）,2例发生自身免疫性溶血,1例发生肺部感染,Ⅰ-Ⅳ级急性移植物抗宿主病（acute graft versus host disease,a GVHD）的发生率为6.7%（2/30）,其中1例为Ⅱ度皮肤a GVHD,1例Ⅱ度肠道a GVHD,无慢性移植物抗宿主病（graft versus host disease,GVHD）发生。7例患儿在移植后发生病毒激活,其中4例发生巨细胞病毒血症（cytomegaloviremia,CMV）,1例发生EB病毒血症,1例出现了BK病毒性膀胱炎,1例同时感染CMV、BK病毒。随访期间的总体存活率为96.7%（29/30）,1例患儿在移植后4个月发生自身免疫性溶血,继发肺部感染死亡,其余29例患儿在随访期间症状改善明显。结论:HSCT可以挽救MPSⅡ型患者的生命,标准化的随访和多学科团队合作有助于准确评估移植后的长期效果,进一步提高MPSⅡ型患者的生活质量。目前关于造血干细胞移植治疗MPSⅡ型患者益处的数据非常有限,本研究通过对30例患儿进行随访以了解HSCT的优势。第三部分中国黏多糖贮积症Ⅱ型基因型和临床表型汇总分析目的:探讨MPSⅡ型基因型和临床表型相关性。方法:检索中国知网、万方、Pub Med、中国生物医学文献数据库2022年1月1日之前发表的诊断为MPSⅡ型疾病的中国患者相关文献资料,共有35篇文献进行了基因报道。中文检索词为“黏多糖贮积症Ⅱ型”、“艾杜糖酸-2-硫酸酯酶基因”、“亨特综合征”,英文检索式为“Mucopolysaccharidosis typeⅡ”、“MPSⅡ”、“IDS gene”、“Hunter syndrome”。结果:共纳入35篇文献,共有274例患者具有完整的基因检测结果,这些患者自于261个不同的家庭。其中男性患者272例,女性患者2例,男女比例为136∶1,最小患者在新生儿期筛查确诊,最大患者确诊时年龄大于30岁。48.9%的患者存在点突变,最常见的是错义突变。我们将鉴定的IDS致病变异与表型（严重型或轻型）相关联。7种突变类型引起基因型和临床表型不一致,其中2种突变发生在同胞兄弟中,新生儿筛查有助于早期发现MPSⅡ患者。结论:这项对中国MPSⅡ病例大规模分子谱的全面研究揭示了基因型-表型相关性,有助于更好地了解疾病和预测其临床进展,从而能够为受影响的患者提供更精细的遗传咨询。