论文部分内容阅读
目的：先天性胆总管囊肿(Congenital choledochal cyst, CCC)，是小儿时期常见的一种先天性胆道发育异常，表现为肝外胆道远端狭窄及管壁发育不良或存在胆胰管合流异常，使胆汁淤积，排出障碍导致胆总管扩张。先天性胆总管囊肿在婴幼儿期发病者中占2/3，其他1/3见于青年，男女比例为1:4~5[1]。截至目前，先天性胆总管囊肿的病因仍不十分明确，近年来随着对本病形态学、胆汁酶学及动物实验等研究的进展，认为CCC是由多种因素造成的先天发育异常，而胆总管远端神经、肌肉发育不良的发病因素越来越受到人们的重视。胆道的神经分布包括胆道壁内的内在神经和外来神经系统两部分，二者相互协调，共同调节胆道的功能。研究表明调节胆道的神经递质主要有兴奋性递质Ach和抑制性递质NO，但CCC病变囊肿中不同神经递质的分布及其与不同囊肿类型的关系仍不十分清楚。故本研究通过利用RT-PCR的方法检测对比CCC患儿肝外胆道不同部位间神经网络结构中合成抑制性神经递质NO的关键酶-一氧化氮合酶（Neuronal Nitric Oxide Synthase, nNOS）和兴奋性递质Ach的关键酶-胆碱乙酰转移酶（Choline acetyltransferas, CHAT）的表达情况，从基因水平和神经动力角度分析肠神经调控异常在CCC发病机制中的作用，从而进一步完善CCC的发病机理，为其临床治疗提供重要的理论依据。方法：随机选取2011年1月~2012年9月河北医科大学第二医院小儿外手术治疗的先天性胆总管囊肿患儿20例作为研究对象，男6例，女14例，男：女=1：2.3；年龄8月~11岁，平均年龄4.33±2.94岁，其中以腹痛就诊患儿12例，以黄染便白就诊患儿4例，以发热就诊患儿2例，胆道穿孔的患儿1例，产前B超检查发现1例，所有患儿术前经过B超或CT检查后明确诊断，手术切去胆总管囊肿及胆囊，行肝管空肠Roux-en-Y吻合术或肝管十二指肠吻合术，分别切取胆总管囊肿远、近端管壁和胆囊壁作为远端组、近端组和胆囊组，将三组标本液氮速冻后置于-70℃冰箱中保存。用荧光定量RT-PCR方法检测各组标本中nNOSmRNA和CHAT mRNA转录水平的表达情况，所得数据输入SPSS13.0for Windows软件进行数据分析， P＜0.05为具有统计学意义。结果：通过RT-PCR检测先天性胆总管囊肿不同部位CHAT和nNOS基因的表达情况，发现上述指标在各组中有不同表达。CHAT和nNOS基因在先天性胆总管囊肿的近端组表达分别为1.38±0.21，1.65±0.16；在远端组表达分别为1.79±0.21，1.15±0.17；在胆囊组的表达分别为1.30±0.19，1.57±0.12；在囊状扩张型CCC远端管壁中的表达为1.74±0.21，1.11±0.15；在梭状扩张型CCC远端管壁中的表达为1.86±0.20，1.22±0.18。统计学分析发现CHAT基因在先天性胆总管囊肿的近端组、胆囊组的表达均少于囊肿远端组表达（P＜0.05），有显著性差异；而CHAT基因在近端组和胆囊组之间没有显著性差异（P＞0.05）。nNOS基因在先天性胆总管囊肿近端组、胆囊组表达均多于远端组（P＜0.05），有显著性差异；而在近端组和胆囊组之间没有显著性差异（P＞0.05），无统计学意义。CHAT基因和nNOS基因在囊状扩张型CCC远端组和梭形扩张型CCC远端组中表达量之间比较无显著性差异（P＞0.05）。结论：1. CHAT基因表达在CCC远端表达多于囊肿的近端和胆囊，说明兴奋性胆碱能神经在先天性胆总管囊肿的远端分布相对增多，导致远端胆管环形平滑肌痉挛性收缩，导致CCC发病。2. nNOS基因表达在CCC远端表达少于近端和胆囊，说明抑制性神经在胆总管囊肿远端分布减少，胆管远端平滑肌舒张受限，导致胆总管囊肿的形成。3. CHAT、nNOS基因在近端组和胆囊组表达无明显差异，说明肠神经动力调控异常可能以胆总管囊肿的远端病变为主。4.兴奋性和抑制性神经递质的分布异常在不同病理类型CCC的发病中并不存在差异。