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第一部分RNA干扰survivin基因治疗大肠癌的体外实验研究目的用RNA干扰技术特异性抑制大肠癌细胞SW480 survivin基因的表达,并联合放射或化疗药物,探讨其对SW480细胞的影响。方法1、合成靶向人survivin基因的siRNA,使用脂质体转染的方法导入大肠癌细胞SW480,RT-PCR检测转染前后细胞survivin mRNA的表达,免疫细胞化学检测转染前后细胞survivin蛋白的表达;2、镜下观察转染前后SW480细胞形态的变化,流式细胞仪检测转染前后的细胞周期分布,联合放射或5-Fu,MTT法检测SW480细胞生长抑制率,Annexin V-FITC/PI法检测SW480细胞凋亡。结果1、RT-PCR、免疫细胞化学结果显示靶向survivin的siRNA能有效抑制人大肠癌细胞SW480 survivin mRNA及蛋白的表达;2、流式细胞仪检测显示SW480细胞转染survivin siRNA后出现细胞周期G2/M阻滞;3、MTT结果显示survivin siRNA或放射、5-Fu均能有效抑制大肠癌细胞SW480的生长,survivin siRNA联用放射或5-Fu效果更明显;4、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测显示转染survivin siRNA或放射、5-Fu均能使SW480细胞凋亡增加,survivin siRNA联用放射或5-Fu细胞凋亡率更高。结论1、靶向survivin的siRNA能有效抑制大肠癌细胞SW480 survivin基因的表达;2、靶向survivin的siRNA能够引起大肠癌细胞SW480 G2/M周期阻滞;3、靶向survivin的siRNA能够抑制大肠癌细胞SW480的生长并能诱导大肠癌细胞SW480的凋亡;4、靶向survivin的siRNA对大肠癌细胞SW480具有放射及5-Fu化疗增敏作用。第二部分RNA干扰survivin基因治疗大肠癌的体内实验研究目的观察靶向survivin的siRNA或联合放射对大肠癌细胞SW480裸鼠皮下移植瘤的治疗作用并探讨其可能机制。方法1、建立大肠癌细胞SW480裸鼠皮下移植瘤模型,瘤内及瘤周注射survivin siRNA或联合放射治疗;2、观察survivin siRNA或联合放射对裸鼠皮下瘤生长的影响;3、取标本后进行HE染色,免疫组化S-P法检测肿瘤组织survivin、caspse-3、bax的表达;TUNEL法检测肿瘤组织原位凋亡。结果1、单纯放射或联合瘤内注射survivin siRNA均能延缓大肠癌细胞SW480裸鼠皮下移植瘤的生长,以二者联用效果最显著,单纯注射survivin siRNA对肿瘤的生长抑制作用较弱;2、免疫组化检测显示瘤内注射survivin siRNA能够抑制肿瘤survivin的表达,各治疗组caspase-3、bax表达均有不同程度的增加,以survivin siRNA联合放射组caspase-3、bax表达增加最显著。结论1、靶向survivin的siRNA瘤内注射联合放射较单纯放射能更显著的延缓大肠癌细胞SW480裸鼠皮下移植瘤的生长,从体内实验说明靶向survivin的siRNA对大肠癌具有放射增敏作用; 2、靶向survivin的siRNA可能通过抑制survivin表达、上调caspase-3及bax表达的机制促进细胞凋亡,从而起放射增敏的作用。