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第一部分:散发性阿尔茨海默病的β-分泌酶(BACE1)编码区多态性病例—对照研究目的检测散发性阿尔茨海默病(sporadicAlzheimersdisease,SAD)与淀粉样β分泌酶(β-amyloidprecursorproteincleavingenzyme,BACE1)编码区基因多态性的相关性以阐明BACE1基因在SAD发病机制中的作用。
材料:和方法选择美国国家生物技术信息中心(NCBI)单核苷酸序列多态性数据库(SNPdatabase)中BACE1编码区的单核苷酸多态性(SNP)位点,利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测99例SAD患者和140例正常人各多态性位点的基因型后,进行病例—对照相关性分析。
结果:①NCBI的SNP数据库中共提供4个BACE1编码区的单核苷酸多态SNP位点,分别为位于BACE1基因编码区外显子8的C/A(rs11216349)多态性位点,位于外显子5的C/G(rs608435)多态性位点和位于外显子9的G/T(rs1061659)和C/T(rs539765)多态性位点。其中rs11216349,rs1061659,rs539765均未在我们的样本中检测到。②位于第5外显子上的G/C多态性(rs608435),在病例组中,G和C等位基因的频率分别为28.8%和71.2%,在对照组中两者的频率分别为37.9%和62.1%。等位基因的频率在两组中分布明显不同(p=0.039),携带C等位基因增加了AD的发病危险性(OR=1.50795%CI=1.02~2.23)。
结论:BACE1编码区上的3个多态性(rs11216349,rs1061659,rs539765)在我国汉人人群中非常少见或不存在。外显子5上的G/C多态性(rs608435)的C等位基因可能通过某种途径增加了SAD发病危险性。
第二部分:β分泌酶及淀粉样前体蛋白、去整合蛋白和金属蛋白水解酶10在血管因素与SAD病理联系机制中的作用目的研究缺氧及复氧损伤对BACE1以及淀粉样前体蛋白(Amyloidprecursorprotein,APP)、去整合蛋白和金属蛋白水解酶10(adisintegrinandmetalloprotease10,ADAM10)mRNA和蛋白水平的影响,以研究它们在血管因素与SAD病理联系机制中的作用。
方法:分为缺氧24h组及各自对照。缺氧组在缺氧条件下(95%N2,5%CO2)分别培养SH-SY5Y细胞24h后复氧,分别于0h、12h、24h利用逆转录-聚合酶链反应(Reversetranscriptional-polymerasechainreaction,RT-PCR)方法和Western-blotting方法检测BACE1及APP、ADAM10mRNA和蛋白水平;对照组在正常情况下培养,与缺氧组同一时间进行接种和处理。
结果:①缺氧培养SH-SY5Y细胞24h后复氧各时间点APPmRNA水平与对照组相比差别无统计学意义,分别P=0.66,0.33,0.947;APP蛋白与对照组相比差别亦无统计学意义,分别P=0.187,0.79,0.757。②BACE1在缺氧24h后复氧各时间点mRNA水平分别较对照组上调20.8%,31.5%和35.10%,P=0.155,0.028,0.005;蛋白水平分别较对照组增加22%,42%和51.5%,P=0.021,0.000和P=0.000。③ADAM10在缺氧24h后复氧各时间点mRNA水平分别较对照组下调30.1%、75.9%、86.5%,P=0.009,0.005,0.043;蛋白水平分别较对照组下降25.5%、67.3%、75.9%,P=0.001,0.001,P=0.000。
结论:缺氧及复氧可以增加BACE1表达和降低ADAM10表达。提示血管因素可能使APP更易通过产生淀粉样肽(β-amyloidpeptide,Aβ)途径裂解,而参与SAD的病理过程。