论文部分内容阅读
目的:探讨逆转录酶抑制剂(AZT)对脑胶质瘤干细胞端粒酶活性和细胞增殖的影响,为应用其治疗脑胶质瘤提供实验依据。方法:1.从新鲜脑肿瘤标本中分离培养脑胶质瘤干细胞和脑胶质瘤细胞。2.细胞免疫荧光检测脑肿瘤干细胞特异性标志物CD133和nestin。3.实验分成AZT实验组(0.5mol/L、0.25mol/L、0.125mol/L)和空白对照组。MTT法检测AZT对细胞生长增殖的影响。流式细胞仪检测细胞凋亡和周期的改变。TRAP-PCR-ELISA法检测端粒酶活性的变化。结果:1.少数肿瘤细胞能够在无血清培养基中存活并悬浮增殖,形成克隆性脑胶质瘤干细胞球。传代后脑胶质瘤干细胞仍保持很强的自我更新和增殖能力,表达特异性标志物CD133和nestin。2.AZT作用24h后,0.25mol/L组脑胶质瘤干细胞生长增殖受抑制(P<0.05),0.125mol/L组脑胶质瘤细胞生长增殖受抑制(P<0.05),0.5mol/L组脑胶质瘤干细胞出现显著性差异(P<0.05)。3.AZT作用24h后,0.5mol/L组脑胶质瘤干细胞端粒酶活性降低(P<0.05),0.25mol/L组脑胶质瘤细胞端粒酶活性降低(P<0.05),在实验范围内,呈现时间-剂量依赖性。4.AZT作用72h后,脑胶质瘤干细胞的凋亡峰为4.21%(0.25mol/L)、10.6%(0.50mol/L),脑胶质瘤细胞的凋亡峰为6.75%(0.25mol/L)、14.3%(0.50mol/L)。结论:1.本实验初步证实了人脑多形性胶质母细胞瘤中存在有脑肿瘤干细胞,可以通过无血清培养方法获得。2.神经干细胞的标记物CD133和nestin可以用来鉴定脑肿瘤干细胞。3.逆转录酶抑制剂对脑胶质瘤干细胞和脑胶质瘤细胞都有明显的抑制作用,脑胶质瘤干细胞药物敏感性低于脑胶质瘤细胞。