牡蛎肉味道鲜美,营养价值极高,素有“根之源”、“海中牛奶”的美称,据典籍记载牡蛎肉具有增强男性性功能的潜在药用价值。牡蛎多肽也具备良好的生物活性,对应用于改善性功能食品的开发有着巨大的潜能。随着社会人口老龄化趋势加剧、生活压力增大、环境污染加剧、民众运动意识薄弱等问题的出现,睾酮缺乏性疾病的发病率逐年增高。睾酮作为最主要的雄激素,对维持肌肉质量和强度、性欲及勃起次数等起着关键作用,睾酮缺乏会对男性各器官系统的发育造成严重的影响。本文运用酶解法制备太平洋牡蛎活性肽,对其进行分离纯化,并评价了其促进小鼠体外睾酮分泌活性。主要研究结果如下:(1)采用16s rRNA基因检测方法对原料牡蛎进行物种鉴定,利用BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)方法,将最后得到的基因序列在NCBI数据库中进行比对,和太平洋牡蛎16s rRNA基因序列的吻合度达到100%,通过实验证实所采用的原料为太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)。(2)通过单因素实验,以多肽得率为指标,考察不同加酶量、pH值、酶解温度、酶解时间对多肽得率的影响,根据单因素实验结果进行正交试验分析,确定木瓜蛋白酶的最佳酶解条件为:加酶量3000 U/g,pH 6.5,酶解温度62.5℃,酶解时间4.5 h,其多肽浓度为14.95 mg/mL。(3)牡蛎酶解液及其超滤组分在0.25-1mg/mL浓度范围内,与空白对照组相比,能够显著增加TM3细胞增殖和分泌睾酮的活性,尤其是<5 ku和5~10 ku两个超滤组分。根据蛋白质回收率及分子量分布情况,对组分OP-I(<5 ku)进行进一步的分离纯化及体外活性测定。(4)通过Sephadex G-25凝胶层析色谱分离纯化酶解超滤组分OP-Ⅰ(<5 ku),收集纯化得到的3个组分(OP-Ia、OPⅠb和OPⅠc),并对其进行促进小鼠体外睾酮分泌活性评价,OP-Ⅰb组分在不同浓度(0.1、0.2、0.5mg/mL)下对TM3细胞的细胞增殖活性均有显著增强作用,OP-Ⅰb在24 h作用时间内对TM3细胞增殖的最佳作用浓度为100μg/mL。在100μg/mL作用浓度范围内,OP-Ⅰb对TM3细胞的增殖活性具有显著的浓度依赖性。与空白对照组和另外两个分离组分OP-Ia、OP-Ⅰc相比,OP-Ⅰb组分在三个浓度(50、100和200μg/mL)下均能显著促进TM3细胞体外分泌睾酮。(5)对OP-Ⅰb进一步分离纯化,F1经过Sephadex G-15凝胶层析分离得到两个峰。对这两个组分进行促进小鼠体外睾酮分泌活性评价,F2组分的活性明显优于F1,且对促进小鼠体外分泌睾酮呈现一定的浓度依赖性。