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本课题研究内蒙古锡林郭勒草原苏尼特羊软骨中的胶原蛋白和胶原蛋白肽的分离、纯化和提取以及胶原蛋白肽的分子量、氨基酸组成和抗氧化性。研究结果如下:以羊软骨为试验材料,经脱脂、脱钙、除杂蛋白等前处理过程后,采用乙酸-胃蛋白酶酶解的方法从羊软骨中提取胶原蛋白,并进一步分离纯化。结果表明,最佳脱脂剂为氯仿:甲醇:水=1:2:0.8,其脱脂率为55.88%;最佳脱钙试剂为0.5mol/LEDTA,其脱钙率为29.16%。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳结果显示提取的胶原蛋白与sigma公司的II型标准品相一致。紫外光谱分析显示提取胶原的最大吸收峰为230nm左右。采用羟脯氨酸标准曲线的方法测定提取物中II型胶原蛋白含量为40.58%。以提取的II型胶原蛋白为试验材料,研究三种不同蛋白酶对胶原蛋白肽提取率的影响;采用最佳蛋白酶水解,对酶解温度、pH值、时间、酶添加量四个因素进行分析;利用Design-Expert8.0.5.0软件设计胶原蛋白肽制备的响应面试验方案,得到二次多项式回归模型的最优条件:温度65℃,pH11.0,酶添加量1.13%,验证试验与预测值基本吻合。采用SepHadex G-50层析的方法对提取物进行分离纯化。对提取的胶原蛋白多肽进行氨基酸组成的分析。分析结果表明,提取物中胶原蛋白特有的甘氨酸和脯氨酸含量非常高,证实提取物为胶原多肽产物。对分离纯化后出现的两个蛋白峰进行分子量测定。结果表明峰1的分子量范围为887.4452-1705.8848Da,峰2的分子量范围为315.9514-488.9621Da。以清除羟基自由基、超氧阴离子能力和水解物还原能力为指标分别测定两个蛋白峰的抗氧化性。结果表明,峰2(处理组2)的抗氧化性优于峰1(处理组1)。