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【目的】本课题利用小分子干扰RNA（siRNA）靶向抑制血管平滑肌细胞（VSMC）中Cbfα-1基因表达，观察Cbfα-1表达抑制对高磷诱导的VSMC成骨样转分化及钙盐沉积的影响，从而探讨Cbfα-1在高磷诱导的VSMC钙化中的作用，试图进一步阐明CKD血管钙化的可能机制，并为治疗提供可能的靶点。【方法】1.组织块贴壁法原代培养VSMC,倒置相差显微镜观察细胞形态及α-SMA免疫组化鉴定；3～8代VSMC用于实验。2.针对大鼠Cbfα-1基因设计合成4对候选siRNA序列，以阳离子脂质体为载体，转染体外培养的VSMC细胞；FAM荧光标记siRNA测定转染效率并优化转染条件。RT-PCR法分析4对候选siRNA序列对Cbfα-1基因表达的抑制作用，筛选出有效siRNA序列。3.将筛选出的有效siRNA序列转染VSMC，细胞分为4组：(1)正常磷（1.3mmol/L）组；(2)高磷（2.6mmol/L）组；(3) siRNA转染组：高磷（2.6mmol/L）+转染试剂+Cbfα-1-siRNA（有效siRNA序列）；(4)阴性转染对照组：高磷（2.6mmol/L）+转染试剂+阴性对照siRNA，转染后24h、48h通过RT-PCR技术检测成骨样转分化相关基因Cbfα-1、骨桥蛋白（OPN）mRNA表达情况；转染后48、72h采用Western Blot方法检测Cbfα-1、OPN蛋白表达情况；转染后第6天通过茜素红染色法检测细胞钙盐沉积情况。所有实验至少重复3次。【结果】1.细胞鉴定：双目倒置相差显微镜下，大鼠VSMC为梭形细胞，呈典型的“峰－谷”样生长。抗α-SMA抗体免疫组织化学染色显示，VSMC胞浆内见大量棕色颗粒。2.荧光显微镜下观察显示，在Cbfα-1-siRNA浓度为100nmol/L、Lipo为8μL/孔转染条件下，转染效率约55%；RT-PCR结果显示Cbfα-1siRNA1952序列相对基因抑制水平最强，转染24h以后沉默效率达81.77%，故作为有效siRNA序列。3. RT-PCR结果显示，转染后24h，与正常磷组相比，高磷组VSMC中Cbfα-1及OPN mRNA表达明显增加（P＜0.01），与高磷组及阴性转染对照组相比，siRNA转染组Cbfα-1mRNA表达明显降低（P＜0.01），而三组间OPN mRNA表达无明显差异（P＞0.05）；转染后48h，siRNA转染组Cbfα-1mRNA表达仍低于高磷组及阴性转染对照组（P＜0.05），但高于正常磷组（P＜0.05），OPN mRNA表达低于高磷组及阴性转染对照组（P＜0.05），但高于正常磷组（P＜0.05）。4. Western Blot结果显示，转染后48h，与正常磷组相比，高磷组Cbfα-1及OPN蛋白表达明显增加（P＜0.01），siRNA转染组Cbfα-1蛋白表达较高磷组及阴性转染对照组明显降低（P＜0.01），三组间OPN蛋白表达无明显差异（P＞0.05）；转染后72h，siRNA转染组Cbfα-1蛋白表达仍低于高磷组及阴性转染对照组（P＜0.05），但高于正常磷组（P＜0.05），OPN蛋白表达低于高磷组及阴性转染对照组（P＜0.05），但高于正常磷组（P＜0.05）。5.茜素红染色结果显示，正常磷组细胞无明显钙盐沉积，高磷组和阴性转染对照组细胞钙盐沉积明显，而siRNA转染组细胞钙盐沉积明显减轻。【结论】1.高磷条件可在体外成功诱导大鼠VSMC钙化。化学合成的Cbfα-1siRNA通过脂质体瞬时转染可以有效抑制VSMC Cbfα-1基因和蛋白的表达。2. Cbfα-1基因沉默可明显抑制高磷诱导的VSMC向成骨样转分化及细胞钙化；Cbfα-1可望成为CKD血管钙化治疗的靶点。