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高危型人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)与肿瘤的启动、发生、发展及恶性表型的全过程都密切相关,是与人类肿瘤关系最为密切的肿瘤病毒。E6及E7蛋白是HPV的主要转化蛋白。E6蛋白通过与p53结合使其功能失活、激活端粒酶、破坏细胞粘附、极性和上皮分化等参与诱导细胞增殖、永生化和转化等过程,并能减少HPV感染细胞被免疫系统识别。E6蛋白的截短体(E6*)能逆转E6蛋白的功能,恢复胞内P53功能,稳定Caspase-8蛋白原,促进细胞发生凋亡,是一种潜在的抗HPV感染引发的肿瘤药物。本论文从HeLa细胞中克隆E6蛋白的截短体(HPV18E6*)编码基因,将其在大肠杆菌中重组表达,细胞水平上初步验证其抑癌效果。首先,以宫颈癌HeLa细胞cDNA为模版,PCR扩增了HPV18E6*基因,构建的重组表达载体HPV18E6*-pET28a导入大肠杆菌BL21(DE3)后IPTG诱导了HPV18E6*的表达,表达量占菌体总蛋白的20%左右；37℃主要以不溶包涵体为主,15℃全部以微量的可溶形式表达；包涵体变复性获得纯蛋白。其次,人工合成了含有HPV-18E6*末端序列的HIV-TAT PTD11个氨基酸或9个精氨酸(R9)的寡核苷酸引物,PCR扩增了融合蛋白HPV18E6*-TAT和HPV18E6*-R9基因,成功构建了重组表达载体HPV18E6*TAT-pET28a与HPV18E6*R9-pET28a；质粒导入受体菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目标蛋白HPV18E6*-TAT和HPV18E6*-R9表达量占菌体总蛋白30%左右；25℃诱导以可溶性表达为主；亲和层析不能获得大量重组蛋白,15%与20%饱和度的硫酸铵分级沉淀分别获得纯度85%以上的重组HPV18E6*TAT和HPV18E6*R9蛋白。接着,FITC标记重组蛋白HPV18E6*、HPV18E6*TAT和HPV18E6*R9蛋白,细胞实验显示,含穿膜肽序列的HPV18E6*TAT和HPV18E6*R9较无穿膜肽序列的HPV18E6*能更好地跨越HeLa和A549细胞的细胞膜进入细胞质中。最后,重组蛋白对HeLa和A549细胞增殖影响及促凋亡实验表明：三种重组蛋白对HeLa细胞的增殖均无明显的抑制作用；HPV18E6*对A549细胞的增殖也无明显效果；HPV18E6*R9和HPV18E6*TAT能明显抑制A549细胞的增殖,IC50分别为60.5ug/ml与59.0ug/ml；AO/EB双染可视化显示了药物蛋白对细胞的凋亡促进作用；流式细胞确定HPV18E6*TAT和HPV18E6*R9蛋白对A549细胞阻滞在G2/M期。