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目的: 口腔白斑(oral leukoplakia,OLK)是指“口腔粘膜上以白色病变为主的损害,不具有其他任何可定义的损害特征;一部分口腔白斑可转化为癌”。OLK属于癌前病变,有转化为口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的潜能,其主要病理改变是上皮增生。研究表明有4%-40%的病人会发生癌变,其转化为口腔鳞状细胞癌的风险比正常人高50到100倍。其转化是一个受多因素影响的多阶段、多步骤的复杂过程。而口腔鳞状细胞癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤。有实验发现角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)在肿瘤的发生发展及转移中可能发挥一定作用。本实验通过对正常口腔粘膜、OLK和OSCC三种组织的成纤维细胞进行培养,并用免疫细胞化学检测KGF在这三种培养的细胞中的表达;通过免疫组化及原位杂交技术检测正常口腔粘膜、OLK、OSCC组织中KGF mRNA及蛋白的表达,以研究其在三种不同组织中的变化规律,探讨其在癌变过程中的作用及意义。 方法: 1.对口腔正常粘膜、OLK及OSCC三种不同组织的成纤维细胞进行体外培养;MTT比色试验检测三种不同组织成纤维细胞的生物学活力;免疫组化技术检测三种成纤维细胞角蛋白及波形蛋白表达。免疫细胞化学SP法检测KGF在三种成纤维细胞中的表达。 2.收集临床及病理确诊的口腔正常粘膜、OLK及OSCC标本共34例,将每个标本的五张切片分别进行HE染色、免疫组化、原位杂交和阴性对照(2张),根据免疫组化和原位杂交的结果分别从蛋白和分子水平观察KGF在不同组织中的表达情况。 3.对免疫组化及原位杂交的结果进行图像分析:切片输人图像分析系统,对表达强度进行半定量分析。每张切片计算5个高倍视野下总阳性细胞数,并取其