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雪莲PEBP基因是本实验室分离出的新抗寒相关基因，共有510个核苷酸，网上进行BLAST对比，与拟南芥(Arabidopsis thaliana)中的磷脂酰乙醇胺结合蛋白基因类似，相似性81％。本实验以实验室构建的Teasy-PEBP质粒为模板，扩增PEBP基因，克隆到表达载体pET30(+)和pPIC9k并导入大肠杆菌BL21(DE3)和毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115细胞内表达，纯化表达产物，优化表达条件，主要结果如下：根据pET30(+)多克隆位点设计PEBP基因特异性引物，引入EcoRⅠ和NcoⅠ酶切位点，以Teasy-PEBP质粒为模板，扩增PEBP基因，连接到原核表达载体pET30(+)上，转化感受态表达菌株BL21(DE3)，在低温下，低浓度IPTG诱导融合蛋白表达，纯化表达产物，Western blot鉴定目的蛋白，SDS-PAGE分析：其相对分子量约为28KD，与预期相符，表达量约占菌体蛋白的26．8％，并且通过亲和层析纯化了重组融合蛋白，Western blot鉴定为阳性。根据pPIC9k多克隆位点设计PEBP基因引物，分别加入EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点，以Teasy-PEBP质粒为模板，扩增PEBP基因，克隆到表达载体pPIC9k，得到重组质粒并命名为pPIC9k-PEBP，将pPIC9k-PEBP用SalⅠ进行酶切，线性化后的pPIC9k-PEBP以电转化法导入到酵母GS115细胞中，利用MM和MD平板筛选Mut~s(methanol utilization slow)表型，PCR鉴定重组酵母菌株，乙醇诱导表达。SDS-PAGE分析：其相对分子量约为20KD，蛋白表达量可占总蛋白的90％，上清液抗冻检测表明，PEBP能降低液体的冰点，具有一定的抗冻作用。优化重组质粒pPIC9k-PEBP在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中的表达条件，初步得到最佳的重组蛋白表达条件为：诱导剂甲醇浓度为0．5％，诱导培养基的PH为6．0，诱导温度为32℃，诱导时间为216h。实验成功构建了表达载体pET-PEBP和pPIC9k-PEBP，获得了高效表达产物，并为进一步研究雪莲PEBP的抗冻功能奠定基础。